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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » [求助] 用HPLC测对苯二酚的甲醇溶液出来多个峰，求高人指点
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lichunmei89

银虫 (初入文坛)

[求助] [求助] 用HPLC测对苯二酚的甲醇溶液出来多个峰，求高人指点

我用HPLC测对苯二酚的甲醇溶液，在2-3保留时间内出现两三个峰，而且是肩峰，没有分开。但在同条件下用对苯二酚水溶液做就只有2.8左右的一个峰，而且峰型非常好。对苯二酚纯度为98%，甲醇是色谱纯的，分析条件是流动相：甲醇：水=20：80，波长：290nm，流速1ml/min。求高人指点！！
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1楼 2013-10-14 15:13:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ajshen

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
suruiqin: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来分析版~ 2013-10-15 10:31:11
lichunmei89: 金币+10, ★有帮助 2013-10-15 16:38:29
楼主应该是在反相条件下分离的吧？纯甲醇溶解的对苯二酚溶液，醇甲醇是强洗溶剂，导致样品穿透，容易出现峰展宽甚至是峰裂分/肩峰；对于纯水溶解的对苯二酚溶解，水是弱洗溶剂，不会造成样品穿透，因此出现一个单峰。
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JESSICA
3楼2013-10-14 16:34:22
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ajshen

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lichunmei89 at 2013-10-15 08:37:02
是c18柱，这种现象怎么解决呢？因为我要做甲醇的萃取，所以先用甲醇溶解样品试试效果，结果出现肩峰。如果没有好的解决方法，我怎么计算回收率呢？是单独算2.8那个峰还是把几个峰面积合并后计算呢？...

直接合并计算峰面积应该是不行的，可以像楼上说的，降低洗脱强度，增加保留时间，同时降低进样量就可以降低溶剂效应了。还有一个办法是用甲醇萃取后加水稀释，防止样品还有高有机溶剂，但是这样可能你样品整体浓度就降低了~
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JESSICA
8楼2013-10-15 11:56:43
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ajshen

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lichunmei89: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-16 16:14:06
release53: 金币+1, 辛苦了 2013-11-11 14:01:46
内容已删除
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JESSICA
12楼2013-10-16 14:03:37
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hexued6933

版主 (著名写手)

日出东方，岂能不败

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
suruiqin: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来分析版~ 2013-10-15 10:31:29
lichunmei89: 金币+8, ★有帮助 2013-10-15 16:38:44
甲醇的溶剂效应还好。以防万一，可以尝试用20%甲醇溶解样品，用水稀释至刻度。一般用流动相溶解样品，很大概率消除溶剂效应。另外，酸类物质最好使用酸性体系，酚类物质在中性条件很多时候峰形不佳。希望对楼主有用
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大家好，才是真的好
4楼2013-10-14 20:19:16
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da1234mao

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lichunmei89: 金币+2 2013-10-15 16:39:21
是这样的，你要么把流动相的甲醇必烈加大，要么水溶解，加点酸都行，对二苯酚应该是一个酸的，在水中会解离，离子形态不同而已。酸应该可以缓解
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7楼2013-10-15 10:55:25
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ajshen

木虫 (小有名气)
★ ★
suruiqin: 金币+2, 感谢您的热心交流，欢迎常来分析版~ 2013-10-17 09:04:37
引用回帖:
13楼: Originally posted by lichunmei89 at 2013-10-16 16:18:22
不过我的对苯醌标样用各种条件都试了，比如减少进样量、用初始流动相溶解，流动相加酸都试了，可是还是两个峰，而且两个峰是完全分开了的，这样是不是只可能是样品的问题了？...

这样的话有可能是你标准品还有杂质~初始流动相溶解都出现这种问题的话，应该不是穿透了~要么是样品本身有杂质，要么是样品本身不稳定容易产生杂质咯~
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JESSICA
14楼2013-10-16 16:54:40
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賈玉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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lichunmei89: 金币+3, ★有帮助 2013-10-21 10:44:32
对苯二酚在流动相中会有一部分变成对苯二醌的，，流动相用乙腈：0.1%的磷酸水溶液=60：40  色谱柱ODS  C18
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15楼2013-10-17 14:26:32
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賈玉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

流动相用乙腈：水（PH=4.0用磷酸调节），对苯二酚的分析条件我们做过的
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16楼2013-10-17 14:28:02
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普通回帖

安定的心mary

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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lichunmei89: 金币+2, 这些我已经试过了，非常感谢回复! 2013-10-15 16:40:49
release53: 金币+1, 感谢交流 2013-11-11 14:01:59
溶剂不同不应该有这么大的差别，建议各进一针溶剂，确定溶剂峰，并多做几份样品查看是否是样品污染
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追寻自己的梦想，结交有志之友
2楼2013-10-14 16:00:41
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jixfeng

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lichunmei89: 金币+3, ★有帮助 2013-10-15 08:42:00
引用回帖:
4楼: Originally posted by hexued6933 at 2013-10-14 20:19:16
甲醇的溶剂效应还好。以防万一，可以尝试用20%甲醇溶解样品，用水稀释至刻度。一般用流动相溶解样品，很大概率消除溶剂效应。另外，酸类物质最好使用酸性体系，酚类物质在中性条件很多时候峰形不佳。希望对楼主有用

嗯 ，减低浓度（在甲醇中试试），或者增加保留时间后甲醇中也就一个峰了。
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不要寻找借口
5楼2013-10-14 23:44:39
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lichunmei89

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ajshen at 2013-10-14 16:34:22
楼主应该是在反相条件下分离的吧？纯甲醇溶解的对苯二酚溶液，醇甲醇是强洗溶剂，导致样品穿透，容易出现峰展宽甚至是峰裂分/肩峰；对于纯水溶解的对苯二酚溶解，水是弱洗溶剂，不会造成样品穿透，因此出现一个单峰 ...

是c18柱，这种现象怎么解决呢？因为我要做甲醇的萃取，所以先用甲醇溶解样品试试效果，结果出现肩峰。如果没有好的解决方法，我怎么计算回收率呢？是单独算2.8那个峰还是把几个峰面积合并后计算呢？
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6楼2013-10-15 08:37:02
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lichunmei89

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ajshen at 2013-10-15 11:56:43
直接合并计算峰面积应该是不行的，可以像楼上说的，降低洗脱强度，增加保留时间，同时降低进样量就可以降低溶剂效应了。还有一个办法是用甲醇萃取后加水稀释，防止样品还有高有机溶剂，但是这样可能你样品整体浓度 ...

我用对苯二酚反应完之后产物是对苯醌，即2.8min和4.3min左右，但我的对苯醌标样在这种条件下有一个3.1min的峰，这样对我定量2.8和4.3min的物质有没有影响？
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9楼2013-10-15 16:44:47
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ajshen

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lichunmei89 at 2013-10-15 16:44:47
我用对苯二酚反应完之后产物是对苯醌，即2.8min和4.3min左右，但我的对苯醌标样在这种条件下有一个3.1min的峰，这样对我定量2.8和4.3min的物质有没有影响？...

不是很明白楼主意思，是对苯醌标样也穿透了吗？
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JESSICA
10楼2013-10-15 16:59:08
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