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jinanxmz

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC求助

提取分离新手，现在已经分到一定程度的样品跑HPLC
。。。
用MeOH和3%醋酸跑的，25%MeOH等度洗脱30min
3.5min和4.8min出两个峰 纵坐标才到4
TLC 365下有蓝色荧光一点 254看不到，硫酸显色泛黄。。。查帖子貌似是黄酮类？？
       254有一点硫酸显偏黑色
现在不知道下一步怎么办了 怎么能让保留时间延长些呢
3.5min也太快了点吧。。。。。
我实验室没有专门提取分离的老师，完全摸瞎，毕业堪忧。。。
求前辈知道，新手木有金币，聊表心意啊。。。。。
HPLC求助
ピン２.jpg


HPLC求助-1
拼2.jpg
6：4:1没出来。。。

[ Last edited by jinanxmz on 2013-7-12 at 18:28 ]
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1楼 2013-07-12 18:27:33
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wangkaibo123

荣誉版主 (职业作家)

kerry

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你进样量是多少啊？为什么吸收那么弱？不会是你样品没跑出来吧？你冲柱时有峰没？
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Domyallbesttohaveahappylife.
2楼2013-07-12 18:48:55
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wanglibo66

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2013-07-16 00:12:37
增大流动相极性，减少甲醇的比例，如15%或20%的甲醇，保留时间就延长了。
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3楼2013-07-13 08:10:53
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Tony_young

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
增加水相比例～

[ ????????? http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-07-13 08:44:31
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redyna渊

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主什么柱子，C18么？要是C18肯定是大极性的物质，流动相极性要降下来的
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5楼2013-07-13 22:16:31
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0shihongjuan

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 谢谢回复！ 2013-07-16 00:12:50
进一针空白。对比一下。还有大概知道提取分离的是什么吧！进对照品看是不是所要峰别瞎忙活 ！至于峰高问题可能是高效液相条件不对，柱子 流动性比例（甲醇少用点）。看你那图两分钟左右的是溶剂峰吧 可能你真没分离出东西来
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6楼2013-07-13 22:20:48
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aliyue

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
karl2100: 金币+1, 谢谢！ 2013-07-16 00:13:00
如果是C18的话，保留时间在3分钟，还是可以的，也不是说保留时间越长越好，主要是看你的组分能不能分得开。
实在要延长的话，就调节比例吧，把流动相的极性调节大一些。
另外，你可以换一你的流动相，改成甲醇（或者乙腈）-水做流动相，适当调节柱温，流速0.8-1，等度。如果分不开的话，添加0.3%的乙酸。
进样的话，应该不会有问题的，如果是自动进样。。。
希望采纳，不采纳，你可以试一下。。。愿顺利毕业
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[Bruce Lee] [药物分析与工艺分析]
7楼2013-07-15 19:41:10
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aliyue

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

对了，另外有一点，你的基线有点问题
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[Bruce Lee] [药物分析与工艺分析]
8楼2013-07-15 19:46:39
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260919368

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

还是应该考虑样品的急性，峰的吸收很弱，考虑是否样品没有被系脱下来，在冲洗柱子时观察是否有强吸收峰。
乙腈和水的梯度洗脱分离度一般来说会好些，淡然有些黄酮类物质还是甲醇比较好些。
其实应该先确定你样品的最大吸收波长，找到最强的吸收波长，总感觉你的吸收峰弱，当然也可能是样品浓度很低。
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9楼2013-07-17 09:19:50
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乘风牧云

木虫 (职业作家)

--
你的目的是什么啊亲，你是什么化合物都要还是有目标峰，什么都要就增大进样量，把峰都接出来就好了，有目标峰的话要标定一下是哪个峰，直奔目标去就好了
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乘长风以牧青云
10楼2013-07-23 11:37:35
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