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xin_yue11

新虫 (初入文坛)

[求助] 肝微粒体的体外代谢 已有1人参与

我做肝微粒体体外孵育,孵育体系如下:肝微粒体1mg/ml,非那西丁浓度为20ug/ml,NADPH浓度为1mmol/l  ,用PBS补充至500ul,实验操作如下:依次加入肝微粒体,非那西丁,pbs,预孵育5min后,加入NADPH,在37度下,孵育30min,但是发现非那西丁几乎没有代谢,为什么?
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fraser

银虫 (正式写手)

楼主,你好,我最近也在做肝微粒体代谢,现在数据出来了,CLint不知道怎么计算,不知道楼主是否能提供帮助。
肝微粒体1mg/ml,待测化合为3uM/L,反应体系100ul,15min和60min浓度为 2.8uM/L和1.83uM/L.谢谢。求计算方法
2楼2013-10-11 10:50:27
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xin_yue11

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fraser at 2013-10-11 10:50:27
楼主,你好,我最近也在做肝微粒体代谢,现在数据出来了,CLint不知道怎么计算,不知道楼主是否能提供帮助。
肝微粒体1mg/ml,待测化合为3uM/L,反应体系100ul,15min和60min浓度为 2.8uM/L和1.83uM/L.谢谢。求计算方 ...

我也不清楚啊,查阅相关文献也没找到,你做的肝微粒体外孵育体系成功吗
3楼2013-10-15 20:42:26
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fraser

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xin_yue11 at 2013-10-15 20:42:26
我也不清楚啊,查阅相关文献也没找到,你做的肝微粒体外孵育体系成功吗...

我已经找到方法了 ,在BD的网站上有介绍的
4楼2013-10-22 10:23:22
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juliang0612

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
xin_yue11: 金币+2 2013-10-25 21:03:33
考虑一下酶失活或者微粒体里面的亚型酶含量不够吧(这个可能性小),另外就是你的NADPH启动是不是有什么问题,我以前做的时候好像没用NADPH的现成溶液,但整个孵育没用问题。
5楼2013-10-24 22:58:14
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上山捉鱼

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

刚做过微粒体体外代谢,你的问题应该是蛋白失活所致
6楼2013-10-25 09:45:52
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xin_yue11

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 上山捉鱼 at 2013-10-25 09:45:52
刚做过微粒体体外代谢,你的问题应该是蛋白失活所致

恩,我用s-9做,没问题,好像是NADPH出问题了
7楼2013-10-25 21:04:12
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郑梅

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主,你的非那西丁是用什么溶解的,最近试了很多方法都不太好,最后用甲醇—水(5:5)溶的,但孵育后基本不代谢,求助
眼中有路,心中有光
8楼2016-01-11 17:14:38
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LEE啊哦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fraser at 2013-10-22 10:23:22
我已经找到方法了 ,在BD的网站上有介绍的...

BD网站,我试着搜索,并没有找到介绍方法,请问可以详细说明一下搜索途径吗?谢谢~
9楼2017-12-14 10:29:59
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