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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 有无必要制备动物血清进一步做细胞试验？
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bianyu

铜虫 (正式写手)

[求助] 有无必要制备动物血清进一步做细胞试验？

植物提取物的体内抗纤维化效果还不错，但是对HSC-T6的体外实验一直没有阳性结果，有人建议制备动物血清，然后用血清做细胞试验，看看是不是药物的代谢物在起作用？
请教大家：
（1）这种方法是不是属于药代动力学的范畴？在我的这个实验上可不可行？有无必要啊？
（2）动物血清的制备方法，我查了好多资料是制备免疫动物血清的，请问有什么区别?
谢谢！
提前祝大家节日快乐！
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1楼 2011-09-07 11:28:12
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pal2004

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
bianyu(金币+10): 谢谢，还有待于进一步学习 2011-09-07 13:45:16
jiangchunyong(金币+1): 谢谢应助!欢迎常来！ 2011-09-07 13:49:02
用含药血清培养细胞当然可以，但是做出了活性，如果怀疑是代谢物产生的活性，首先应该验检测代谢物是否存在，可以做体外药代研究，比如模拟胃肠道环境以及用肝微粒转化提取物；也可以做体内药代，分析体液，检测化学成分变化，分离纯化可能的代谢产物，最后药效验证。
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2楼2011-09-07 13:07:23
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bianyu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pal2004 at 2011-09-07 13:07:23:
用含药血清培养细胞当然可以，但是做出了活性，如果怀疑是代谢物产生的活性，首先应该验检测代谢物是否存在，可以做体外药代研究，比如模拟胃肠道环境以及用肝微粒转化提取物；也可以做体内药代，分析体液，检测化 ...

我的提取物与代谢物可能存在很小的差异，可以用MS得出的分子量来验证吗？因为如果纯化体液，可能需要很大量，有点小难啊！
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3楼2011-09-07 13:52:30
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破土草儿

木虫 (正式写手)
★
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2011-09-07 23:00:07
引用回帖:
1楼: Originally posted by bianyu at 2011-09-07 11:28:12:
植物提取物的体内抗纤维化效果还不错，但是对HSC-T6的体外实验一直没有阳性结果，有人建议制备动物血清，然后用血清做细胞试验，看看是不是药物的代谢物在起作用？
请教大家：
（1）这种方法是不是属于药代动力 ...

用含药血清做一下，看是否有效。如果有效，把含药血清上质谱鉴定一下化合物，再对比文献，猜测可能有效的成分（群)，再用该成分的标准品去做体外实验，看是否有效。
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4楼2011-09-07 16:50:58
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pal2004

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bianyu at 2011-09-07 13:52:30:
我的提取物与代谢物可能存在很小的差异，可以用MS得出的分子量来验证吗？因为如果纯化体液，可能需要很大量，有点小难啊！

验证代谢物用MS比较快，只要液质条件合适，如果血样指纹出现了某个提取物中没有的新成分，而且呈剂量依赖性变化，那就有可能是你要的代谢物，当然最关键的是要做结构确证，不管用什么手段，只要分出来的东西够打谱就行。如果鉴定的是已知化合物，可以直接买对照品做活性，如果是新化，量小的话想从体液富集确实挺难的，所以做体外转化还是比较靠谱，比如通过肝微粒催化后也出现同样的成分，那你就可以大量制备后再把它分出来做活性。
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5楼2011-09-07 17:49:34
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bianyu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pal2004 at 2011-09-07 17:49:34:
验证代谢物用MS比较快，只要液质条件合适，如果血样指纹出现了某个提取物中没有的新成分，而且呈剂量依赖性变化，那就有可能是你要的代谢物，当然最关键的是要做结构确证，不管用什么手段，只要分出来的东西够打 ...

请教采用肝微粒体催化的话，需要什么条件啊？我们没做过相关的实验，谢谢楼上，不知你们在这方面是不是很专业啊?
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6楼2011-09-11 11:48:03
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bianyu

铜虫 (正式写手)
qinhy: 建议单独开贴问问题~这样应助率高一点~ 2011-09-12 20:11:19
另外问个问题，体内代谢和体外肝微粒体转化是不是相同的原理？体内血清中的代谢物是不是经肝微粒体转化后的得到的？仅化合物本身的变化而言
还有就是我的这种化合物A，前人有过报道，经体内吸收后会转化成B，我还有没有必要再去验证呢？还是直接引用前人的文献？谢谢啦！
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7楼2011-09-11 12:11:05
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pal2004

木虫 (正式写手)
★ ★
jiangchunyong(金币+2): 谢谢应助!欢迎常来！ 2011-09-13 15:39:26
引用回帖:
7楼: Originally posted by bianyu at 2011-09-11 12:11:05:
另外问个问题，体内代谢和体外肝微粒体转化是不是相同的原理？体内血清中的代谢物是不是经肝微粒体转化后的得到的？仅化合物本身的变化而言
还有就是我的这种化合物A，前人有过报道，经体内吸收后会转化成B，我还 ...

这都是基础药代知识，我简单描述一下。
药物在体内的生物转化主要有两个步骤：
Ⅰ相代谢反应，药物在这相反应中被氧化、还原或水解；催化Ⅰ相反应的酶主要为肝微粒体中的细胞色素P450酶系，当然还有黄素单氧合酶、醇脱氢酶等等。
Ⅱ相代谢反应，药物在这一相反应中与一些内源性的物质如葡萄糖醛酸、甘氨酸、硫酸
等结合或发生甲基化、乙酰化反应，催化Ⅱ相反应的酶有许多，其中主要的
有葡萄糖醛酸转移酶、谷胱甘肽-S-转移酶、磺基转移酶和乙酰基转移酶等。
Ⅱ相代谢物一般都是排出体外的，你要研究药物经生物转化后的活性当然主要研究的是Ⅰ相代谢物，而Ⅰ相代谢酶主要在肝微粒体里，所以做体外转化当然也要用肝微粒体。
如果有人研究过，你要看看他研究的是那一相的代谢，如果是Ⅰ相代谢，给药后取血做液质验证一下也不是很麻烦。
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8楼2011-09-13 10:26:44
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bianyu

铜虫 (正式写手)
谢谢楼上，还想请教几个问题：
1）有无必要动物体内代谢和体外肝微粒体均做？
2）如果我用动物做药物的代谢，有用药时间的说法。我看文献上有几个小时的有隔天的，那么有什么依据吗？如果我想分几个时间段，比如用药后2h，4h，8h，12h，24h。。。有无必要？
3）如果连续采血，能否采用眼眶取血在一只大鼠上采集？还是每次采集都要换一只？
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9楼2011-09-13 15:32:29
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啄木鸟88

禁虫 (小有名气)
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bianyu
10楼2011-09-19 08:16:43
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