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bianyu

铜虫 (正式写手)

[求助] 有无必要制备动物血清进一步做细胞试验?

植物提取物的体内抗纤维化效果还不错,但是对HSC-T6的体外实验一直没有阳性结果,有人建议制备动物血清,然后用血清做细胞试验,看看是不是药物的代谢物在起作用?
请教大家:
(1)这种方法是不是属于药代动力学的范畴?在我的这个实验上可不可行?有无必要啊?
(2)动物血清的制备方法,我查了好多资料是制备免疫动物血清的,请问有什么区别?
谢谢!
提前祝大家节日快乐!
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pal2004

木虫 (正式写手)

★ ★
jiangchunyong(金币+2): 谢谢应助!欢迎常来! 2011-09-13 15:39:26
引用回帖:
7楼: Originally posted by bianyu at 2011-09-11 12:11:05:
另外问个问题,体内代谢和体外肝微粒体转化是不是相同的原理?体内血清中的代谢物是不是经肝微粒体转化后的得到的?仅化合物本身的变化而言
还有就是我的这种化合物A,前人有过报道,经体内吸收后会转化成B,我还 ...

这都是基础药代知识,我简单描述一下。
药物在体内的生物转化主要有两个步骤:
Ⅰ相代谢反应,药物在这相反应中被氧化、还原或水解;催化Ⅰ相反应的酶主要为肝微粒体中的细胞色素P450酶系,当然还有黄素单氧合酶、醇脱氢酶等等。
Ⅱ相代谢反应,药物在这一相反应中与一些内源性的物质如葡萄糖醛酸、甘氨酸、硫酸
等结合或发生甲基化、乙酰化反应,催化Ⅱ相反应的酶有许多,其中主要的
有葡萄糖醛酸转移酶、谷胱甘肽-S-转移酶、磺基转移酶和乙酰基转移酶等。
Ⅱ相代谢物一般都是排出体外的,你要研究药物经生物转化后的活性当然主要研究的是Ⅰ相代谢物,而Ⅰ相代谢酶主要在肝微粒体里,所以做体外转化当然也要用肝微粒体。
如果有人研究过,你要看看他研究的是那一相的代谢,如果是Ⅰ相代谢,给药后取血做液质验证一下也不是很麻烦。
8楼2011-09-13 10:26:44
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pal2004

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


bianyu(金币+10): 谢谢,还有待于进一步学习 2011-09-07 13:45:16
jiangchunyong(金币+1): 谢谢应助!欢迎常来! 2011-09-07 13:49:02
用含药血清培养细胞当然可以,但是做出了活性,如果怀疑是代谢物产生的活性,首先应该验检测代谢物是否存在,可以做体外药代研究,比如模拟胃肠道环境以及用肝微粒转化提取物;也可以做体内药代,分析体液,检测化学成分变化,分离纯化可能的代谢产物,最后药效验证。
2楼2011-09-07 13:07:23
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bianyu

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pal2004 at 2011-09-07 13:07:23:
用含药血清培养细胞当然可以,但是做出了活性,如果怀疑是代谢物产生的活性,首先应该验检测代谢物是否存在,可以做体外药代研究,比如模拟胃肠道环境以及用肝微粒转化提取物;也可以做体内药代,分析体液,检测化 ...

我的提取物与代谢物可能存在很小的差异,可以用MS得出的分子量来验证吗?因为如果纯化体液,可能需要很大量,有点小难啊!
3楼2011-09-07 13:52:30
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破土草儿

木虫 (正式写手)


karl2100(金币+1): 谢谢! 2011-09-07 23:00:07
引用回帖:
1楼: Originally posted by bianyu at 2011-09-07 11:28:12:
植物提取物的体内抗纤维化效果还不错,但是对HSC-T6的体外实验一直没有阳性结果,有人建议制备动物血清,然后用血清做细胞试验,看看是不是药物的代谢物在起作用?
请教大家:
(1)这种方法是不是属于药代动力 ...

用含药血清做一下,看是否有效。如果有效,把含药血清上质谱鉴定一下化合物,再对比文献,猜测可能有效的成分(群),再用该成分的标准品去做体外实验,看是否有效。
4楼2011-09-07 16:50:58
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