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hefang198898

新虫 (初入文坛)

[交流] 人肝微粒体体外代谢的问题 已有9人参与

本人做的是格列齐特经人肝微粒体体外代谢实验的研究,我实验中人肝微粒浓度为1mg/ml,格列齐特浓度为3uM,NADPH再生系统组成为(氯化镁 5 mM,葡萄糖-6-磷酸10 mM,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 1 U, NADP+1mM)。在37度温孵几小时后,HPLC测定格列齐特原药的消除情况,重复做了好几次都未发现原药有减少的趋势。查到相关文献指出格列齐特主要经过CYP2C9代谢,后来改用重组酶CYP2C9 20pmol/ml温孵1小时后,也未发现原药有减少的趋势,希望各位高手提出点意见,是什么原因导致药物未出现代谢。
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ronaldoli198311

至尊木虫 (正式写手)

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xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-08 11:12:36
做这种实验需要有阳性对照,如果阳性对照没问题那就是酶活性和所用试剂没问题,另外因为加入的药物量比较少误差较大,若药物代谢不明显的话很可能从峰面积上开不出来变化,建议液质检测下代谢产物看看
7楼2012-02-08 09:12:34
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普通回帖

kkbyb

木虫 (著名写手)

★ ★
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karl2100(金币+1): 谢谢回帖! 2011-12-12 21:35:39
用其他品种或标准品检测酶活力
2楼2011-11-17 15:12:01
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hefang198898

新虫 (初入文坛)

我用格列喹酮和美托洛尔试了,有代谢啊,酶应该没有失活
3楼2011-11-17 15:17:33
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hefang198898

新虫 (初入文坛)

我用格列喹酮和美托洛尔试了,有代谢啊,酶应该没有失活
4楼2011-11-17 15:19:43
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lzh_cindy

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问NADPH发生系统如何配置的?主要是6-磷酸葡萄糖脱氢酶不会配置呀。希望高人指点
5楼2011-12-12 17:57:37
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liou

木虫 (小有名气)

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leecius(金币+1): 谢谢。 2011-12-16 08:13:21
引用回帖:
5楼: Originally posted by lzh_cindy at 2011-12-12 17:57:37:
请问NADPH发生系统如何配置的?主要是6-磷酸葡萄糖脱氢酶不会配置呀。希望高人指点

40U/mL的脱氢酶溶解在5mM的柠檬酸钠溶液中,-20℃保存即可。
6楼2011-12-15 21:20:37
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心情一杯

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问在孵育体系中各成分的量怎么配置啊?NADPH是自己配还是购买呢?刚接触,请各位大侠支招啊
8楼2012-03-25 21:05:31
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Nancy1988

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
154083楼: Originally posted by liou at 2011-12-15 21:20:37
40U/mL的脱氢酶溶解在5mM的柠檬酸钠溶液中,-20℃保存即可。...

-20℃保存!!!用的时候再解冻,但这样反复冻融恐怕也有影响吧
9楼2012-11-21 23:19:21
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liou

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以分装一下,每次用拿出一支,反复冻融几次是没有影响的。
10楼2012-11-23 22:12:00
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