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蒽酮比色法测水稻幼苗可溶性糖、淀粉的含量 已有1人参与
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蒽酮比色法测水稻幼苗可溶性糖、淀粉的含量，包括具体的实验步骤，以及注意事项 越详细越好 |
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【答案】应助回帖
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可溶性总糖的测定（蒽酮比色法） 摘要： 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法. 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比. 这一方法有很高的灵敏度,糖含量在 30ug 左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用.一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适. 三、仪器、试剂和材料 1 、仪器 （1）分光光度计 （2）电子顶载天平 （3）三角瓶： 50m1 X 1 （4）大试管： 9 支 （5）试管架,试管夹 （6）漏斗,漏斗架 （7）容量瓶： 50rnl X 2 （8）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1 （9）水浴锅 2、试剂 （1）葡萄糖标准液： l00ug/ml （2）浓硫酸 （3）蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用. 3、材料 小麦分蘖节。 四、操作步骤 1 、葡萄糖标准曲线的制作 取 7 支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（ ug ） 0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发.自水浴重新煮沸起,准确煮沸 l0min 取出,用流水冷却,室温放置 10min ,在 620 nm 波长下比色.以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标,以吸光值作纵坐标,作出标准曲线. 2 、植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下,准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中,加沸水 25m1 ,在水浴中加盖煮沸 10min ,冷却后过滤,滤液收集在 50m1 容量瓶中,定容至刻度.吸取提取液 2m1 ,置另一 50m1 容量瓶中,以蒸馏水稀释定容,摇匀测定. 3、测定 吸取 lml 已稀释的提取液于大试管中,加入 4.Oml 蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作.比色波长 620nm ,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ ug ）. 查表所得糖含量（ ug ）×稀释倍数 五、结果处理 六、注意事项 1、该显色反应非常灵敏,溶液中切勿混入纸屑及尘埃. 2、 H 2 SO 4 要用高纯度的. 3、不同糖类与蒽酮的显色有差异,稳定性也不同.加热、比色时间应严格掌握. 七、思考题 1、用水提取的糖类有哪些？ 2、制作标准曲线时应注意哪些问题？ |
10楼2014-05-13 16:19:25
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【答案】应助回帖
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蒽酮比色法 1、试剂 (1)．1%蔗糖标准液 将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度； (2)．100μg/ml蔗糖标准液 精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。 (3)．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中 （4）标准曲线： 管号 0 1 2 3 4 5 100μg/ml蔗糖液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量（μg） 0 20 40 60 80 100 按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 2、测定方法 可溶性糖的提取（鲜样） 取新鲜甘薯样品，擦净表面污物，剪碎混匀，称取1 g，放入带刻度试管中，加入10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取3次），提取液过滤入100mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。 显色测定 ：吸取1ml糖提取液定容至100ml，吸取样品稀释液2ml于20ml刻度试管中（重复2次），按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度、由标准曲线查得待测液的含糖量。 3、结果计算 可溶性糖含量(mg/g)=C*V/( a*m*1000) 式中 C－标准方程求得糖量(μg)；a－吸取样品液体积(ml)；V－提取液量(ml)；m－称样质量（g）。 根据不同作物，因含糖量不同，稀释倍数自己摸索，希望对你有所帮助！ |
2楼2013-09-28 08:12:38
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5楼2013-09-28 20:52:20
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8楼2014-05-12 09:48:57
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