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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 作物 » 蒽酮比色法测水稻幼苗可溶性糖、淀粉的含量
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走在路上ing

金虫 (初入文坛)

[求助] 蒽酮比色法测水稻幼苗可溶性糖、淀粉的含量已有1人参与

蒽酮比色法测水稻幼苗可溶性糖、淀粉的含量，包括具体的实验步骤，以及注意事项
     越详细越好
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1楼2013-09-27 21:04:44
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nkylgx

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
木虫/panda: 金币+2, 最好结合自己的实际经验来说说 2014-05-13 22:27:05
走在路上ing: 金币+6, ★★★很有帮助, 3 2014-05-17 19:32:54
可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）
摘要： 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100
一、目的
    掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法.
二、原理
    强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.
    这一方法有很高的灵敏度,糖含量在 30ug 左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用.一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适.
三、仪器、试剂和材料
1 、仪器
（1）分光光度计
（2）电子顶载天平
（3）三角瓶： 50m1 X 1
（4）大试管： 9 支
（5）试管架,试管夹
（6）漏斗,漏斗架
（7）容量瓶： 50rnl X 2
（8）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1
（9）水浴锅
2、试剂
（1）葡萄糖标准液： l00ug/ml
（2）浓硫酸
（3）蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用.
3、材料
小麦分蘖节。
四、操作步骤
1 、葡萄糖标准曲线的制作
取 7 支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：
管号        1        2        3        4        5        6        7
葡萄糖标准液（ ml ）        0        0.1        0.2        0.3        0.4        0.6        0.8
蒸馏水（ ml ）         1        0.9        0.8        0.7        0.6        0.4        0.2
葡萄糖含量（ ug ）        0        10        20        30        40        60        80

    在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发.自水浴重新煮沸起,准确煮沸 l0min 取出,用流水冷却,室温放置 10min ,在 620 nm 波长下比色.以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标,以吸光值作纵坐标,作出标准曲线.
2 、植物样品中可溶性糖的提取
    将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下,准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中,加沸水 25m1 ,在水浴中加盖煮沸 10min ,冷却后过滤,滤液收集在 50m1 容量瓶中,定容至刻度.吸取提取液 2m1 ,置另一 50m1 容量瓶中,以蒸馏水稀释定容,摇匀测定.
3、测定
    吸取 lml 已稀释的提取液于大试管中,加入 4.Oml 蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作.比色波长 620nm ,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ ug ）.
    查表所得糖含量（ ug ）×稀释倍数
五、结果处理
六、注意事项
1、该显色反应非常灵敏,溶液中切勿混入纸屑及尘埃.
2、 H 2 SO 4 要用高纯度的.
3、不同糖类与蒽酮的显色有差异,稳定性也不同.加热、比色时间应严格掌握.
七、思考题
1、用水提取的糖类有哪些？
2、制作标准曲线时应注意哪些问题？
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10楼2014-05-13 16:19:25
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314584069

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
走在路上ing: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-09-28 10:26:39
蒽酮比色法
1、试剂
(1)．1%蔗糖标准液  将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；
(2)．100μg/ml蔗糖标准液  精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。
(3)．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中
（4）标准曲线：
管号        0        1        2        3        4        5
100μg/ml蔗糖液（ml）        0        0.2        0.4        0.6        0.8        1.0
水（ml）        2.0        1.8        1.6        1.4        1.2        1.0
蔗糖量（μg）        0        20        40        60        80        100
按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
2、测定方法    可溶性糖的提取（鲜样）
     取新鲜甘薯样品，擦净表面污物，剪碎混匀，称取1 g，放入带刻度试管中，加入10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取3次），提取液过滤入100mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
显色测定 ：吸取1ml糖提取液定容至100ml，吸取样品稀释液2ml于20ml刻度试管中（重复2次），按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度、由标准曲线查得待测液的含糖量。
3、结果计算   
可溶性糖含量(mg/g)=C*V/( a*m*1000)  式中  C－标准方程求得糖量(μg)；a－吸取样品液体积(ml)；V－提取液量(ml)；m－称样质量（g）。
根据不同作物，因含糖量不同，稀释倍数自己摸索，希望对你有所帮助！
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2楼2013-09-28 08:12:38
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走在路上ing

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 314584069 at 2013-09-28 08:12:38
蒽酮比色法
1、试剂
(1)．1%蔗糖标准液  将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；
(2)．100μg/ml蔗糖标准液  精确吸取1%蔗糖标 ...

我需要可溶性糖、淀粉分别测，这样只能测可溶性糖，但还是谢谢
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3楼2013-09-28 10:29:45
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314584069

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 走在路上ing at 2013-09-28 10:29:45
我需要可溶性糖、淀粉分别测，这样只能测可溶性糖，但还是谢谢...

貌似一起测得是还原糖吧
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4楼2013-09-28 19:32:51
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