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可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）
摘要： 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100
一、目的?
? ? 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法.?
二、原理?
? ? 强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.?
? ? 这一方法有很高的灵敏度,糖含量在 30ug 左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用.一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适.?
三、仪器、试剂和材料?
1 、仪器?
（1）分光光度计?
（2）电子顶载天平?
（3）三角瓶： 50m1 X 1?
（4）大试管： 9 支?
（5）试管架,试管夹?
（6）漏斗,漏斗架?
（7）容量瓶： 50rnl X 2?
（8）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1?
（9）水浴锅?
2、试剂?
（1）葡萄糖标准液： l00ug/ml?
（2）浓硫酸?
（3）蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用.
3、材料?
小麦分蘖节。?
四、操作步骤?
1 、葡萄糖标准曲线的制作?
取 7 支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：?
管号? ? ? ? 1? ? ? ? 2? ? ? ? 3? ? ? ? 4? ? ? ? 5? ? ? ? 6? ? ? ? 7
葡萄糖标准液（ ml ）? ? ? ? 0? ? ? ? 0.1? ? ? ? 0.2? ? ? ? 0.3? ? ? ? 0.4? ? ? ? 0.6? ? ? ? 0.8
蒸馏水（ ml ） ? ? ? ? 1? ? ? ? 0.9? ? ? ? 0.8? ? ? ? 0.7? ? ? ? 0.6? ? ? ? 0.4? ? ? ? 0.2
葡萄糖含量（ ug ）? ? ? ? 0? ? ? ? 10? ? ? ? 20? ? ? ? 30? ? ? ? 40? ? ? ? 60? ? ? ? 80
? ? 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发.自水浴重新煮沸起,准确煮沸 l0min 取出,用流水冷却,室温放置 10min ,在 620 nm 波长下比色.以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标,以吸光值作纵坐标,作出标准曲线.?
2 、植物样品中可溶性糖的提取?
? ? 将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下,准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中,加沸水 25m1 ,在水浴中加盖煮沸 10min ,冷却后过滤,滤液收集在 50m1 容量瓶中,定容至刻度.吸取提取液 2m1 ,置另一 50m1 容量瓶中,以蒸馏水稀释定容,摇匀测定.?
3、测定?
? ? 吸取 lml 已稀释的提取液于大试管中,加入 4.Oml 蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作.比色波长 620nm ,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ ug ）.?
? ? 查表所得糖含量（ ug ）×稀释倍数?
五、结果处理?
六、注意事项?
1、该显色反应非常灵敏,溶液中切勿混入纸屑及尘埃.?
2、 H 2 SO 4 要用高纯度的.?
3、不同糖类与蒽酮的显色有差异,稳定性也不同.加热、比色时间应严格掌握.?
发自小木虫Android客户端 |
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想问下1.硫酸蒽酮试怎么加的，用的5ml的枪，可是挂壁时间长，吸取和打出都比较慢，影响整体试验结果么，
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