应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手做原核表达 求帮忙
51/1返回列表
查看: 2154  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

862202686

铁虫 (初入文坛)

[求助] 新手做原核表达 求帮忙

老师让我做效应蛋白原核表达，只是给了我一个蛋白序列的登陆号，其他自己摸索。 在看文献问百度之后，了解了效应蛋白，明白了原核表达的基本步骤。梳理一下：
1.提RNA。（因为是真菌，有内含子，只能反转录。）
2.设计引物。
3.反转录PCR。
4.连接T载体，转入感受态，挑阳性克隆送去测序，验证所得序列是否正确。
5.假设序列正确，提质粒，酶切，连接表达载体，转入表达菌。
不知道这样的步骤有哪些地方有错误或者不合理，希望大家给予指正，万分感谢。
还有，我现在想要设计引物，因为老师只给了一个蛋白序列的登录号，我水平有限，在NCBI上只能获得该氨基酸序列对应的cDNA序列，并不能获得完整的cDNA序列，因为没有两端的序列，我就不能设计引物，求帮助！
我是新虫，只有21个金币，真心感谢大神们的帮助指导！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-25 21:51:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

862202686

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenyuqin at 2013-09-25 22:26:22
可以拿ORF设计；或者用BLAST分析一下找对应基因然后设计

ORF怎么设计 求指导
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-26 10:11:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答

淘淘279

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香分子生物期待你的精彩 2013-09-26 00:04:43
内含子个数不多的话也可以提基因组，把蛋白对应的这段基因通过pcr拿下来，再设计引物把内含子p掉。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
你能做的永远不止这些！
2楼2013-09-25 22:24:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuqin

新虫 (小有名气)
可以拿ORF设计；或者用BLAST分析一下找对应基因然后设计
赞一下 回复此楼
where there is a will,there ia a way.
3楼2013-09-25 22:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

862202686

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 淘淘279 at 2013-09-25 22:24:58
内含子个数不多的话也可以提基因组，把蛋白对应的这段基因通过pcr拿下来，再设计引物把内含子p掉。

非常感谢您，但是这样做可能会比较麻烦啊
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-26 09:43:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 23 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭