| 查看: 1897 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
新手做原核表达 求帮忙
|
||
|
老师让我做效应蛋白原核表达，只是给了我一个蛋白序列的登陆号，其他自己摸索。 在看文献问百度之后，了解了效应蛋白，明白了原核表达的基本步骤。梳理一下： 1.提RNA。（因为是真菌，有内含子，只能反转录。） 2.设计引物。 3.反转录PCR。 4.连接T载体，转入感受态，挑阳性克隆送去测序，验证所得序列是否正确。 5.假设序列正确，提质粒，酶切，连接表达载体，转入表达菌。 不知道这样的步骤有哪些地方有错误或者不合理，希望大家给予指正，万分感谢。 还有，我现在想要设计引物，因为老师只给了一个蛋白序列的登录号，我水平有限，在NCBI上只能获得该氨基酸序列对应的cDNA序列，并不能获得完整的cDNA序列，因为没有两端的序列，我就不能设计引物，求帮助！ 我是新虫，只有21个金币，真心感谢大神们的帮助指导！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有284人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于双酶切后回收的问题
已经有12人回复
- 新手用Fluent做GLCC柱状气液分离器模拟遇到困难，请各位帮忙
已经有6人回复
- VASP算能带总是出错，新手求帮忙
已经有3人回复
- 关于PCR引物中加入酶切位点的设计方法和酶切问题！ 新手，求帮忙！！
已经有4人回复
- 新手求助 帮忙看下bode图
已经有21人回复
- 怎么在FDA找到药物毒性评价指导原则啊？新手求帮忙啊！
已经有3人回复
- 化合物做核磁氘代试剂不溶，求高手帮忙！
已经有13人回复
- 原核表达重组质粒提取
已经有7人回复
- 求助：重组质粒酶切问题！请大家帮我解决一下，急！
已经有7人回复
- 有关使用origin处理DSC图，新人，求帮忙
已经有10人回复
- 原核表达pGEX-4T-1载体构建后，菌液pcr用什么引物
已经有12人回复
- ansys新手遭遇错误信息，求高手帮忙解决。。。
已经有10人回复
- 做一个核磁图谱 ，有提供原始数据帮忙做成图！
已经有36人回复
- 【求助】理论计算新手，求帮忙解决带隙及DOS的问题
已经有21人回复
- 【求助】做过核磁共振的高手来帮忙!
已经有7人回复
4楼2013-09-26 09:43:07
淘淘279
铜虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 934.8
- 帖子: 64
- 在线: 16.4小时
- 虫号: 2670382
- 注册: 2013-09-22
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-09-25 22:24:58
3楼2013-09-25 22:26:22
5楼2013-09-26 10:02:39
