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小墨825新虫 (小有名气)
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Triton X-114法提取膜蛋白
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| 利用Triton X-114法分层得到膜蛋白（下层），怎么把Triton X-114去除？有没有可能将膜蛋白转移到水相？衷心求助！ |
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 分子生化实验经验积累 | 蛋白质生物学实验经验 |
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2楼2013-09-17 22:24:52
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小墨825: 金币+20 2013-09-18 15:32:00
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| 膜蛋白在水相中可溶吗（我认为不可溶）？去除表面活性剂之后，蛋白还有活性吗（我认为会沉淀的）？将膜蛋白转移到水相的办法就是用表面活性剂。不可以去除表面活性剂。非要去除表面活性剂的方法也有很多，比如稀释，透析……，但是你的膜蛋白会沉或形成大的聚集体。如果你过分子筛，一定要加表面活性剂，不加的话，蛋白质到了没有表面活性剂助溶的溶液中就会析出，会堵你的分子筛的。表面活性剂一般不影响后续试验，建议保留或换另一种表面活性剂。 |
6楼2013-09-18 11:52:01
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-20 00:57:34
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-20 00:57:34
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对不起，我不太了解你的课题以及实验步骤，我能提供的帮助有限，只说一些个人想法，希望对你有用。 1. 我认为表面活性剂是一头亲水，一头疏水的，那么他与水溶液互溶时，我觉得有两种情况，要么油包水，要么水包油，我觉得分层的现象，应该不是去垢剂的原因，我觉得去垢剂与水是互溶的。不好意思，了解甚少。分层这点希望你能教我。 2. 你说之前过柱都不去除去垢剂，是因为浓度低。我觉得高浓度的表面活性剂能使蛋白质变性，尽管是非离子型的。浓度低一点能提取出来吗？我觉得几个CMC的浓度就应该可以了。 3. 换成另一种表面活性剂是可以的，但是选哪一种表面活性剂是难点。我觉得一般用一种便宜的去垢剂提取，后期换成需要的去垢剂。 互相学习，分层的现象麻烦你教我，你们实验室其他的也分层吗？ |
9楼2013-09-18 19:46:31
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