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小墨825

新虫 (小有名气)

[求助] Triton X-114法提取膜蛋白

利用Triton X-114法分层得到膜蛋白(下层),怎么把Triton X-114去除?有没有可能将膜蛋白转移到水相?衷心求助!
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小墨825

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-09-18 11:52:01
膜蛋白在水相中可溶吗(我认为不可溶)?去除表面活性剂之后,蛋白还有活性吗(我认为会沉淀的)?将膜蛋白转移到水相的办法就是用表面活性剂。不可以去除表面活性剂。非要去除表面活性剂的方法也有很多,比如稀释, ...

我们之前过柱都不去除的,那是因为去垢剂的浓度低,现在经过两相分离,下层都是去污相,呈油状,我也不敢直接上柱,实验室只有superdex 200.但是也要置换成下一步的起始缓冲液,经过您这样提醒似乎置换才是我需要做的而不是去除,之前我也有闪过会出现沉淀的想法,或许还可以复溶???
8楼2013-09-18 16:09:58
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-17 22:41:16
TRITON X-114:2-(2-[4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenoxy]ethoxy)ethanol;二乙二醇单[(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基]醚;聚氧乙烯辛烷基苯酚醚,是一种表面活性剂,会结合到膜蛋白质的表面形成一层亲水层,而表面活性剂的疏水层会结合到膜蛋白质的分子表面,这样包裹了TRITON X-114的蛋白质本身就到了水溶液里
2楼2013-09-17 22:24:52
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小墨825: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-18 15:31:42
要把表面活性剂与膜蛋白质拆开,用分子筛层析分离出表面活性剂的疏水层会结合的膜蛋白质后,放置于烧杯的水溶液中,然后加大水溶液的非极性即可,比如加入水溶中乙醚。
3楼2013-09-17 22:28:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

然后用透析和超滤很容易出去蛋白质溶液中的有机分子,留下蛋白质。
4楼2013-09-17 22:31:27
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