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小墨825

新虫 (小有名气)

[求助] Triton X-114法提取膜蛋白

利用Triton X-114法分层得到膜蛋白(下层),怎么把Triton X-114去除?有没有可能将膜蛋白转移到水相?衷心求助!
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小墨825

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-09-18 19:46:31
对不起,我不太了解你的课题以及实验步骤,我能提供的帮助有限,只说一些个人想法,希望对你有用。
1. 我认为表面活性剂是一头亲水,一头疏水的,那么他与水溶液互溶时,我觉得有两种情况,要么油包水,要么水包油 ...

哎呀,您太谦虚啦!我就是利用Triton X-114的方法分层的,非离子表面活性剂Triton X-114溶液在0 ℃下分布均匀,但高于20 ℃时分为水相和去污相(含膜蛋白)。在初始溶液中加入1%的Triton X-114,进行多次分层,收集下层(占初始体积的六分之一左右)。这一部分呈油状,比较粘稠,我要做下一步的纯化,文献上柱层析里几乎都用Triton X-100.
10楼2013-09-19 16:44:09
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-17 22:41:16
TRITON X-114:2-(2-[4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenoxy]ethoxy)ethanol;二乙二醇单[(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基]醚;聚氧乙烯辛烷基苯酚醚,是一种表面活性剂,会结合到膜蛋白质的表面形成一层亲水层,而表面活性剂的疏水层会结合到膜蛋白质的分子表面,这样包裹了TRITON X-114的蛋白质本身就到了水溶液里
2楼2013-09-17 22:24:52
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小墨825: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-18 15:31:42
要把表面活性剂与膜蛋白质拆开,用分子筛层析分离出表面活性剂的疏水层会结合的膜蛋白质后,放置于烧杯的水溶液中,然后加大水溶液的非极性即可,比如加入水溶中乙醚。
3楼2013-09-17 22:28:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

然后用透析和超滤很容易出去蛋白质溶液中的有机分子,留下蛋白质。
4楼2013-09-17 22:31:27
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