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小墨825

新虫 (小有名气)

[求助] Triton X-114法提取膜蛋白

利用Triton X-114法分层得到膜蛋白(下层),怎么把Triton X-114去除?有没有可能将膜蛋白转移到水相?衷心求助!
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-09-20 00:57:34
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小墨825 at 2013-09-18 16:09:58
我们之前过柱都不去除的,那是因为去垢剂的浓度低,现在经过两相分离,下层都是去污相,呈油状,我也不敢直接上柱,实验室只有superdex 200.但是也要置换成下一步的起始缓冲液,经过您这样提醒似乎置换才是我需要做 ...

对不起,我不太了解你的课题以及实验步骤,我能提供的帮助有限,只说一些个人想法,希望对你有用。
1. 我认为表面活性剂是一头亲水,一头疏水的,那么他与水溶液互溶时,我觉得有两种情况,要么油包水,要么水包油,我觉得分层的现象,应该不是去垢剂的原因,我觉得去垢剂与水是互溶的。不好意思,了解甚少。分层这点希望你能教我。
2. 你说之前过柱都不去除去垢剂,是因为浓度低。我觉得高浓度的表面活性剂能使蛋白质变性,尽管是非离子型的。浓度低一点能提取出来吗?我觉得几个CMC的浓度就应该可以了。
3. 换成另一种表面活性剂是可以的,但是选哪一种表面活性剂是难点。我觉得一般用一种便宜的去垢剂提取,后期换成需要的去垢剂。
互相学习,分层的现象麻烦你教我,你们实验室其他的也分层吗?
9楼2013-09-18 19:46:31
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-17 22:41:16
TRITON X-114:2-(2-[4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenoxy]ethoxy)ethanol;二乙二醇单[(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基]醚;聚氧乙烯辛烷基苯酚醚,是一种表面活性剂,会结合到膜蛋白质的表面形成一层亲水层,而表面活性剂的疏水层会结合到膜蛋白质的分子表面,这样包裹了TRITON X-114的蛋白质本身就到了水溶液里
2楼2013-09-17 22:24:52
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小墨825: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-18 15:31:42
要把表面活性剂与膜蛋白质拆开,用分子筛层析分离出表面活性剂的疏水层会结合的膜蛋白质后,放置于烧杯的水溶液中,然后加大水溶液的非极性即可,比如加入水溶中乙醚。
3楼2013-09-17 22:28:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

然后用透析和超滤很容易出去蛋白质溶液中的有机分子,留下蛋白质。
4楼2013-09-17 22:31:27
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