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小墨825

新虫 (小有名气)

[求助] Triton X-114法提取膜蛋白

利用Triton X-114法分层得到膜蛋白（下层），怎么把Triton X-114去除？有没有可能将膜蛋白转移到水相？衷心求助！
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1楼 2013-09-17 18:52:04
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-20 00:57:34
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小墨825 at 2013-09-18 16:09:58
我们之前过柱都不去除的，那是因为去垢剂的浓度低，现在经过两相分离，下层都是去污相，呈油状，我也不敢直接上柱，实验室只有superdex 200.但是也要置换成下一步的起始缓冲液，经过您这样提醒似乎置换才是我需要做 ...

对不起，我不太了解你的课题以及实验步骤，我能提供的帮助有限，只说一些个人想法，希望对你有用。
1. 我认为表面活性剂是一头亲水，一头疏水的，那么他与水溶液互溶时，我觉得有两种情况，要么油包水，要么水包油，我觉得分层的现象，应该不是去垢剂的原因，我觉得去垢剂与水是互溶的。不好意思，了解甚少。分层这点希望你能教我。
2. 你说之前过柱都不去除去垢剂，是因为浓度低。我觉得高浓度的表面活性剂能使蛋白质变性，尽管是非离子型的。浓度低一点能提取出来吗？我觉得几个CMC的浓度就应该可以了。
3. 换成另一种表面活性剂是可以的，但是选哪一种表面活性剂是难点。我觉得一般用一种便宜的去垢剂提取，后期换成需要的去垢剂。
互相学习，分层的现象麻烦你教我，你们实验室其他的也分层吗？
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9楼2013-09-18 19:46:31
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-17 22:41:16
TRITON X-114:2-(2-[4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenoxy]ethoxy)ethanol;二乙二醇单[(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基]醚;聚氧乙烯辛烷基苯酚醚，是一种表面活性剂，会结合到膜蛋白质的表面形成一层亲水层，而表面活性剂的疏水层会结合到膜蛋白质的分子表面，这样包裹了TRITON X-114的蛋白质本身就到了水溶液里
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2楼2013-09-17 22:24:52
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小墨825: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-18 15:31:42
要把表面活性剂与膜蛋白质拆开，用分子筛层析分离出表面活性剂的疏水层会结合的膜蛋白质后，放置于烧杯的水溶液中，然后加大水溶液的非极性即可，比如加入水溶中乙醚。
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3楼2013-09-17 22:28:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
然后用透析和超滤很容易出去蛋白质溶液中的有机分子，留下蛋白质。
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4楼2013-09-17 22:31:27
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