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小墨825

新虫 (小有名气)

[求助] Triton X-114法提取膜蛋白

利用Triton X-114法分层得到膜蛋白(下层),怎么把Triton X-114去除?有没有可能将膜蛋白转移到水相?衷心求助!
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小墨825

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-09-18 11:52:01
膜蛋白在水相中可溶吗(我认为不可溶)?去除表面活性剂之后,蛋白还有活性吗(我认为会沉淀的)?将膜蛋白转移到水相的办法就是用表面活性剂。不可以去除表面活性剂。非要去除表面活性剂的方法也有很多,比如稀释, ...

我现在得到的下层很粘稠,不好进行下一步的纯化实验,目的是想去除Ttriton X-114.尝试过丙酮沉淀和透析,前者蛋白大量损失,后者根本透不出来,稀释很大倍数都透不出来。我可以使用低浓度的另外的表面活性剂进行置换,您觉得可行么?样品十分粘稠,过分子筛是否也不可行?稀释之后蛋白浓度又达不到,希望您再提意见!
7楼2013-09-18 15:31:17
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-17 22:41:16
TRITON X-114:2-(2-[4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenoxy]ethoxy)ethanol;二乙二醇单[(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基]醚;聚氧乙烯辛烷基苯酚醚,是一种表面活性剂,会结合到膜蛋白质的表面形成一层亲水层,而表面活性剂的疏水层会结合到膜蛋白质的分子表面,这样包裹了TRITON X-114的蛋白质本身就到了水溶液里
2楼2013-09-17 22:24:52
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小墨825: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-18 15:31:42
要把表面活性剂与膜蛋白质拆开,用分子筛层析分离出表面活性剂的疏水层会结合的膜蛋白质后,放置于烧杯的水溶液中,然后加大水溶液的非极性即可,比如加入水溶中乙醚。
3楼2013-09-17 22:28:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

然后用透析和超滤很容易出去蛋白质溶液中的有机分子,留下蛋白质。
4楼2013-09-17 22:31:27
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