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水墨蓝

铁虫 (小有名气)

[求助] 求教G418筛选相关问题!!!!

各种虫友:本人第一次做真核表达,要用到G418筛选CHO细胞,这几天打算做G418的杀灭曲线确定抗生素的筛选浓度,按照查到的方法,200个细胞/孔铺96孔板,过了一天发现细胞没有贴壁,做的时候原始细胞浓度为3.04乘以10的6次方,最终稀释到2乘以10的3次方,每个孔加了100微升,而且由于是第一次做从消化到最终铺板耗费了1 h,是不是因为这个原因所以细胞状态不好就不贴壁?我的操作过程是不是存在什么问题?还有这个操作需要注意些什么?请大家指教!!!还有我看到是转染前细胞的接种量是4乘以10的5次方/孔,想请教这个200个细胞/孔和4乘以10的5次方个细胞/孔,这2个数据是怎么确定的?这2者之间的关系是怎么样的?新手操作,问题多多,还请大家说的详细点儿,O(∩_∩)O~
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