| 查看: 3243 | 回复: 13 | ||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | ||
[求助]
【求助！】有关超滤离心管的问题 已有1人参与
|
||
|
各位大虫好！ 先谢过大家了！ 最近在做一批蛋白 预实验中跑出来的蛋白条带都很模糊，就是整条条带弥散的很严重（如图） 感觉是因为样品中脂类什么的杂质太多了的原因。 所以想能不能用超滤离心管进行处理？ 不知道能不能啊？~~？~~如果可以该用什么规格的牌子的呢···该怎么用呢？ 蛋白样品量很少很少很少···估计目前也就5ml左右（各位见笑了···）真的是太少了··· 附图：  8.19-1.jpg  8.22.jpg  8.26-UV.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有7人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
明天应该可查了！？
已经有5人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有7人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有8人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
人气不行了
已经有10人回复
-
我面上完蛋了
已经有10人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有24人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有17人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 超滤离心管最大规格
已经有5人回复
- 纯化蛋白时关于溶液中咪唑的问题
已经有7人回复
- 请问有谁用过millipore的超滤管？
已经有15人回复
- 怎么解决超滤离心管对药物的吸附
已经有5人回复
- 新人求助：关于如何去除消化物中的小分子，透析袋or超滤离心管？
已经有9人回复
- 关于镍柱纯化蛋白
已经有10人回复
- 求助：超滤离心管是一次性的吗？
已经有11人回复
- 死端超滤和错流超滤的问题
已经有7人回复
- 把玻璃离心管套在塑料离心套管上可以实现高速离心了吗
已经有18人回复
- 请教用超滤离心管除去DNA中的盐分。
已经有4人回复
- 有关Millipore超滤离心管的问题，急！
已经有14人回复
- 关于纳米制剂包封率的检测
已经有9人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 救命！最后一关，proof的几个问题，急
已经有13人回复
- 求教：关于超滤离心管的使用问题
已经有4人回复
- 超滤离心管
已经有6人回复
- 请问大家关于透析出现的问题
已经有10人回复
- 【求助】超滤管的使用
已经有13人回复
- 【求助/交流】关于millpore超滤离心管
已经有8人回复
- 【求助】超滤离心是怎么回事
已经有8人回复
- 【求助/交流】millipore超滤管超滤
已经有8人回复
- 【求助】小弟，初次使用超滤离心管，有问题请教各位大侠，谢谢。。
已经有8人回复
- 【求助/交流】【求助】millipore超滤离心管想重复使用，请问如何清洗和保存？
已经有8人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, BioEPI+1 2013-09-04 08:24:41
silicare: 金币+5, BioEPI+1 2013-09-04 08:24:41
|
用超滤管除去杂蛋白有点不靠谱，不推荐，也很难实现，去除弥散就更不可能了（也许是我孤陋寡闻。。。） 譬如你的蛋白是40KD的，你用了50KD膜的超滤管，你的蛋白不是都会通过膜的，会有部分通过膜，部分没有通过的，就算是10KD左右的杂蛋白也不会都通过膜的。 超滤管一般用来做蛋白的浓缩，或者更换缓冲液更多一点。提高蛋白纯度很难。一般常用的牌子是millipore的。 明显你的蛋白修饰比较多，不知道你的表达系统是什么，糖基化可能性高一点。你可以用糖基化酶进行酶切，如果是糖基化的话，酶切后应该会呈现出单一条带的。 |
6楼2013-09-02 13:37:09
2楼2013-08-30 10:22:11
3楼2013-08-30 20:36:25
4楼2013-09-01 06:44:30
5楼2013-09-02 08:47:54
|
蒽蒽···那不知你觉得通过上面的SDS-PAGE的图觉得目前蛋白是出现了什么问题导致的这样的结果呢？ 我是想不知道能不能通过超滤管做一个除杂神马的···唔··· 做的是蜘蛛吐出来的消化液的电泳分析（预测是蛋白酶之类的） 加过loading buffer 比例1:1（体积比） 上样前煮沸5min，离心处理10000rpm/min，1min 上样量在10ul-15ul不等，marker上样5ul条带正常。 电泳后染色为25%无水乙醇，10%冰醋酸，0.1%的考马斯G-250混合，染色30min，固定液为25%异丙醇+10%冰醋酸混合，固定10min，脱色液为5%的无水乙醇，10%的冰醋酸混合，直至背景色褪去。 试剂配比： 1、分离胶缓冲液：Tirs 18.17g，SDS 0.4g 溶于水，用3mol/L HCl 调至pH8.8，加蒸馏水定容至100ml，其中Tris 为1.5mol/L，SDS为0.4% 2、浓缩胶缓冲液：Tris 6.0g，SDS 0.4g 溶于水，用3mol/L HCl 调至pH6.8，加蒸馏水定容至100ml，其中Tris为0.5mol/L，SDS为 0.4% 3、Arc/Bis：Arc 29.2g，Bis 0.8g 加蒸馏水溶解，定容至100ml，过滤后装入棕色试剂瓶，4℃避光保存。 4、10%过硫酸铵：1g过硫酸铵溶于10ml去离子水中。 5、1*SDS-样品缓冲液（10ml）：甘油 1.0g，SDS 0.2g，β-巯基乙醇 0.5ml，溴酚蓝 0.012%（W/V） 加0.25mol/L Tris-HCl（pH 6.8)到10.0ml 6、电极缓冲液：Tris 3.03g，甘氨酸14.4g，SDS 1.0g，溶于蒸馏水（pH 8.3），定容至1000ml。 |
7楼2013-09-02 19:40:05
8楼2013-09-02 20:49:20
9楼2013-09-03 20:43:25
10楼2013-09-04 09:30:53
20