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【求助！】有关超滤离心管的问题 已有1人参与
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各位大虫好！ 先谢过大家了！ 最近在做一批蛋白 预实验中跑出来的蛋白条带都很模糊，就是整条条带弥散的很严重（如图） 感觉是因为样品中脂类什么的杂质太多了的原因。 所以想能不能用超滤离心管进行处理？ 不知道能不能啊？~~？~~如果可以该用什么规格的牌子的呢···该怎么用呢？ 蛋白样品量很少很少很少···估计目前也就5ml左右（各位见笑了···）真的是太少了··· 附图：  8.19-1.jpg  8.22.jpg  8.26-UV.jpg |
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【答案】应助回帖
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silicare: 金币+5, BioEPI+1 2013-09-04 08:24:41
silicare: 金币+5, BioEPI+1 2013-09-04 08:24:41
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用超滤管除去杂蛋白有点不靠谱，不推荐，也很难实现，去除弥散就更不可能了（也许是我孤陋寡闻。。。） 譬如你的蛋白是40KD的，你用了50KD膜的超滤管，你的蛋白不是都会通过膜的，会有部分通过膜，部分没有通过的，就算是10KD左右的杂蛋白也不会都通过膜的。 超滤管一般用来做蛋白的浓缩，或者更换缓冲液更多一点。提高蛋白纯度很难。一般常用的牌子是millipore的。 明显你的蛋白修饰比较多，不知道你的表达系统是什么，糖基化可能性高一点。你可以用糖基化酶进行酶切，如果是糖基化的话，酶切后应该会呈现出单一条带的。 |
6楼2013-09-02 13:37:09
2楼2013-08-30 10:22:11
3楼2013-08-30 20:36:25
4楼2013-09-01 06:44:30