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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助！】有关超滤离心管的问题
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苍云宝宝

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助！】有关超滤离心管的问题 已有1人参与

各位大虫好！
先谢过大家了！
最近在做一批蛋白
预实验中跑出来的蛋白条带都很模糊，就是整条条带弥散的很严重（如图）
感觉是因为样品中脂类什么的杂质太多了的原因。
所以想能不能用超滤离心管进行处理？
不知道能不能啊？~~？~~如果可以该用什么规格的牌子的呢···该怎么用呢？
蛋白样品量很少很少很少···估计目前也就5ml左右（各位见笑了···）真的是太少了···

附图：
【求助！】有关超滤离心管的问题
8.19-1.jpg


【求助！】有关超滤离心管的问题-1
8.22.jpg


【求助！】有关超滤离心管的问题-2
8.26-UV.jpg
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心得开始
1楼 2013-08-29 15:42:47
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yakir

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 苍云宝宝 at 2013-09-02 19:40:05
蒽蒽···那不知你觉得通过上面的SDS-PAGE的图觉得目前蛋白是出现了什么问题导致的这样的结果呢？
我是想不知道能不能通过超滤管做一个除杂神马的···唔···

做的是蜘蛛吐出来的消化液的电泳分析（预测是 ...

胶本身没有没有什么问题，因为marker看上去还算正常。
应该是蛋白本身的问题，消化液中蛋白，修饰必然很多，跑成这样也是正常的。上样量少点，上个2ul看看，，但是弥散应该还是存在的。我没有什么好的建议，期待其他大虫吧。。。
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一步一步！
8楼2013-09-02 20:49:20
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wsh01300

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
超滤离心管一般用德国Merck公司的产品（Millpore），有不同的规格，最小的是0.5ml,大的有50ml,而且有不同的截留分子量可选择，你可跟据你蛋白的大小来选择截留分子量。
如果你的蛋白是从真核生物中分离获得的，要考滤是否是糖蛋白，可查前人研究的相关资料，
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2楼2013-08-30 10:22:11
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苍云宝宝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wsh01300 at 2013-08-30 10:22:11
超滤离心管一般用德国Merck公司的产品（Millpore），有不同的规格，最小的是0.5ml,大的有50ml,而且有不同的截留分子量可选择，你可跟据你蛋白的大小来选择截留分子量。
如果你的蛋白是从真核生物中分离获得的，要考 ...

那就是可以咯？？？问题是电泳看不出分子量唉···所以我想的是能不能通过利用超滤离心管来除杂纯化蛋白···
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心得开始
3楼2013-08-30 20:36:25
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nixilu110

金虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: BioEPI+1 2013-09-04 08:23:39
wizardfan: 金币+2, BioEPI-1, 不符合EPI要求 2013-09-05 05:56:20
根据你的目的蛋白分子量确定超滤管的规格。一般来说，目的蛋白的分子量是超滤管截留分子量的2-3倍左右。比如你的目的蛋白是40kd, 超滤管最好选20kd一下的规格。
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冷风吹我醒
4楼2013-09-01 06:44:30
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