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苍云宝宝

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助!】有关超滤离心管的问题 已有1人参与

各位大虫好!
先谢过大家了!
最近在做一批蛋白
预实验中跑出来的蛋白条带都很模糊,就是整条条带弥散的很严重(如图)
感觉是因为样品中脂类什么的杂质太多了的原因。
所以想能不能用超滤离心管进行处理?
不知道能不能啊?~~?~~如果可以该用什么规格的牌子的呢···该怎么用呢?
蛋白样品量很少很少很少···估计目前也就5ml左右(各位见笑了···)真的是太少了···

附图:
【求助!】有关超滤离心管的问题
8.19-1.jpg


【求助!】有关超滤离心管的问题-1
8.22.jpg


【求助!】有关超滤离心管的问题-2
8.26-UV.jpg
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心得开始
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yakir

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 苍云宝宝 at 2013-09-02 19:40:05
蒽蒽···那不知你觉得通过上面的SDS-PAGE的图觉得目前蛋白是出现了什么问题导致的这样的结果呢?
我是想不知道能不能通过超滤管做一个除杂神马的···唔···

做的是蜘蛛吐出来的消化液的电泳分析(预测是 ...

胶本身没有没有什么问题,因为marker看上去还算正常。
应该是蛋白本身的问题,消化液中蛋白,修饰必然很多,跑成这样也是正常的。上样量少点,上个2ul看看,,但是弥散应该还是存在的。我没有什么好的建议,期待其他大虫吧。。。
一步一步!
8楼2013-09-02 20:49:20
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wsh01300

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
超滤离心管一般用德国Merck公司的产品(Millpore),有不同的规格,最小的是0.5ml,大的有50ml,而且有不同的截留分子量可选择,你可跟据你蛋白的大小来选择截留分子量。
如果你的蛋白是从真核生物中分离获得的,要考滤是否是糖蛋白,可查前人研究的相关资料,
2楼2013-08-30 10:22:11
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苍云宝宝

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wsh01300 at 2013-08-30 10:22:11
超滤离心管一般用德国Merck公司的产品(Millpore),有不同的规格,最小的是0.5ml,大的有50ml,而且有不同的截留分子量可选择,你可跟据你蛋白的大小来选择截留分子量。
如果你的蛋白是从真核生物中分离获得的,要考 ...

那就是可以咯???问题是电泳看不出分子量唉···所以我想的是能不能通过利用超滤离心管来除杂纯化蛋白···
心得开始
3楼2013-08-30 20:36:25
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nixilu110

金虫 (正式写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: BioEPI+1 2013-09-04 08:23:39
wizardfan: 金币+2, BioEPI-1, 不符合EPI要求 2013-09-05 05:56:20
根据你的目的蛋白分子量确定超滤管的规格。一般来说,目的蛋白的分子量是超滤管截留分子量的2-3倍左右。比如你的目的蛋白是40kd, 超滤管最好选20kd一下的规格。
冷风吹我醒
4楼2013-09-01 06:44:30
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