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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » MTT实验求助
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greenygreen

银虫 (小有名气)

[求助] MTT实验求助

求助一个MTT实验问题：
我在最近的两次实验中，都出现了空白组（只有细胞，不加药组）根本不显色的现象。空白组和给药组的操作都是一样的：
96孔板，200ul 细胞悬液铺板，贴壁90%的时候给药；
包括调零组（只有培养基）；空白组（细胞+DMSO）；实验组（细胞+药——三个药物浓度）；
37度孵育一小时；
各孔加20ul (5mg/ml) MTT溶液，37度孵育4小时显色；
MTT用无菌PBS配制，0.22um滤膜过滤除菌。
4小时之后发现给药组产生了蓝色晶体，但是空白组完全没有晶体产生。
显微镜下观察空白组细胞生长情况较好，为啥不显色呢！！！！

站内MTT的帖子虽然多，但是很多问题都没有解决方法。以上的操作也都严格按照MTT检测的操作进行的。

求助大神！
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1楼 2013-08-28 20:10:27
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greenygreen

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-28 20:29:47
空白组你是加DMSO处理的，你是如何加的，有没有可能DMSO把细胞全杀死了，你看到的观察空白组细胞生长情况较好，细胞是活的吗？请认真观察一下哈

DMSO是直接加入的，是不是应该先和培养基混了再加？
收细胞之前在显微镜下看了，空白组细胞长的很好的。虽然单是看不能保证细胞是活的，但真的没什么影响。
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3楼2013-08-28 20:47:24
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gyesang

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-08-29 18:10:33
空白组你是加DMSO处理的，你是如何加的，有没有可能DMSO把细胞全杀死了，你看到的观察空白组细胞生长情况较好，细胞是活的吗？请认真观察一下哈
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-08-28 20:29:47
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
greenygreen: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-08-28 22:49:30
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-01 17:18:21
引用回帖:
3楼: Originally posted by greenygreen at 2013-08-28 20:47:24
DMSO是直接加入的，是不是应该先和培养基混了再加？
收细胞之前在显微镜下看了，空白组细胞长的很好的。虽然单是看不能保证细胞是活的，但真的没什么影响。...

我观察过，DNSO直接加进孔里，细胞瞬间就死了，加DMSO需要和培养基预混，加药也是一样，他们的密度比较大，局部浓度过大，瞬间就把细胞杀死了
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-08-28 22:10:24
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yilian

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
greenygreen: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-28 22:49:37
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-01 17:18:34
而且DMSO还有浓度要求的，小于5%比较安，最好1%以内

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-08-28 22:46:30
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