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33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] 关于T4连接酶 大家交流下 已有8人参与

我用的是NEB公司的T4普通连接酶,我的质粒比较大有15k左右,目的片段1k,现在我要连接,我是用热击的方法好呢还是用电转好?如果用电转的话电压应该怎么设置呢?还有就是这个酶连接之后要热失活吗?以前用的不是这个公司的酶,都不用失活,可以直接转化的呀,不知这个到底需不需要??
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bullfrog325

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
7楼: Originally posted by 33ggdf at 2013-08-28 02:55:58
谢谢哈 那我就放心了。这个酶你是16度过夜或者更长时间还是就放在室温下连接半个小时??...

我做的是粘端连接, 室温放半个小时

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2013-08-28 16:12:09
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-27 21:59:11
我做过比这个还大的质粒, 用的也是NEB普通T4 DNA连接酶.
我用的是热击, 没有任何问题 (没有尝试过电转, 所以不知道两者效果差别). 不需要在热击前让酶失活.

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-08-27 18:36:03
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-08-27 22:23:38
电转化不失活也能转,不过按照NEB说法转化效率会下降。
3楼2013-08-27 21:29:46
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-27 22:23:46
不失活酶是可以的。电转化的条件主要与转化宿主与电转化杯的尺寸有关,如果用2mm的杯子,大肠杆菌的条件是2.5kv(12.5kv/cm),5ms
4楼2013-08-27 22:08:09
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