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[交流] 关于T4连接酶大家交流下已有8人参与

我用的是NEB公司的T4普通连接酶，我的质粒比较大有15k左右，目的片段1k，现在我要连接，我是用热击的方法好呢还是用电转好？如果用电转的话电压应该怎么设置呢？还有就是这个酶连接之后要热失活吗？以前用的不是这个公司的酶，都不用失活，可以直接转化的呀，不知这个到底需不需要？？

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1楼2013-08-27 15:44:42

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引用回帖:

2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-08-27 18:36:03
我做过比这个还大的质粒, 用的也是NEB普通T4 DNA连接酶.
我用的是热击, 没有任何问题 (没有尝试过电转, 所以不知道两者效果差别). 不需要在热击前让酶失活.

谢谢哈那我就放心了。这个酶你是16度过夜或者更长时间还是就放在室温下连接半个小时？？