应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于T4连接酶 大家交流下
51/1返回列表
查看: 4293  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)

[交流] 关于T4连接酶 大家交流下已有8人参与

我用的是NEB公司的T4普通连接酶，我的质粒比较大有15k左右，目的片段1k，现在我要连接，我是用热击的方法好呢还是用电转好？如果用电转的话电压应该怎么设置呢？还有就是这个酶连接之后要热失活吗？以前用的不是这个公司的酶，都不用失活，可以直接转化的呀，不知这个到底需不需要？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-08-27 15:44:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-27 22:23:38
电转化不失活也能转，不过按照NEB说法转化效率会下降。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-08-27 21:29:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

bullfrog325

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-27 21:59:11
我做过比这个还大的质粒, 用的也是NEB普通T4 DNA连接酶.
我用的是热击, 没有任何问题 (没有尝试过电转, 所以不知道两者效果差别). 不需要在热击前让酶失活.
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

33ggdf
2楼2013-08-27 18:36:03
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-27 22:23:46
不失活酶是可以的。电转化的条件主要与转化宿主与电转化杯的尺寸有关，如果用2mm的杯子，大肠杆菌的条件是2.5kv（12.5kv/cm），5ms
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-08-27 22:08:09
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weithermo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不用失活。为什么不用快速连接酶呢？ 赛默飞世尔有各种快速内切和连接酶，NEB也有。你可以省很多时间，有花不了太多的钱。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-08-28 00:52:00
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭