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123彭好好

新虫 (初入文坛)

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虫号: 2577534
注册: 2013-08-02
专业: 环境生物物理

[求助] 蛋白质SDS-丙烯酰胺凝胶电泳连mark都没有跑动

我利用不同的溶液提取了蛋清中的几种不同溶性的蛋白质，进行了两次电泳，全都失败了。所有的点样及mark都没有动，在63V电压下跑了2个多小时。样品没有经过透析处理，就直接和样品缓冲液混合煮沸了5分钟，就开始点样了。不知道具体的问题出在哪里，让我的实验没有办法正常进行，希望能有人帮我解答！！
以下是我所用的胶的配方：
10%分离胶：
水                                  1.9ml
1.5mol/l Tris-Hcl(PH=8.8) 1ml
30%丙烯酰胺                   1.7ml
10%SDS                         50μl
10%AP                            50μl
TEMED                            2μL

浓缩胶：
水                                  1.4ml
1.5mol/l Tris-Hcl(PH=6.8) 0.25ml
30%丙烯酰胺                   0.33ml
10%SDS                         20μl
10%AP                            20μl
TEMED                            2μL

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1楼2013-08-16 08:59:16

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123彭好好

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by hujiasong at 2013-08-16 16:58:07
我不知道你用的是哪一本书的参考做的，我们用的是下面那本书做的。

你这个问题我们实验室也遇到了，查水、电压、电流等问题都不行，最后检测出来是分离胶的浓度不对，让很多样品一直都在浓缩胶里面跑，根本没 ...

我将胶的配方改了一下
10%分离胶：
水                                  2.6ml
3mol/l Tris-Hcl(PH=8.8)       0.6ml
30%丙烯酰胺                   1.7ml
10%SDS                         50μl
10%AP                            50μl
TEMED                            5μL

浓缩胶：
水                                  0.7ml
1.5mol/l Tris-Hcl(PH=6.8)    0.75ml
30%丙烯酰胺                   1.5ml
10%SDS                         30μl
10%AP                            30μl
TEMED                            4μL
但是还没有开始跑胶，不知道结果会怎样