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123彭好好

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质SDS-丙烯酰胺凝胶电泳 连mark都没有跑动

我利用不同的溶液提取了蛋清中的几种不同溶性的蛋白质,进行了两次电泳,全都失败了。所有的点样及mark都没有动,在63V电压下跑了2个多小时。样品没有经过透析处理,就直接和样品缓冲液混合煮沸了5分钟,就开始点样了。不知道具体的问题出在哪里,让我的实验没有办法正常进行,希望能有人帮我解答!!
以下是我所用的胶的配方:
10%分离胶:
水                                     1.9ml
1.5mol/l Tris-Hcl(PH=8.8)   1ml
30%丙烯酰胺                    1.7ml
10%SDS                            50μl
10%AP                               50μl
TEMED                               2μL

浓缩胶:
水                                     1.4ml
1.5mol/l Tris-Hcl(PH=6.8)   0.25ml
30%丙烯酰胺                    0.33ml
10%SDS                            20μl
10%AP                               20μl
TEMED                               2μL
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sunnymen

银虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
hsd3521: 应助指数-1, 非有效应助 2013-08-17 10:20:50
63V电压,怎么选择这个电压,奇怪
4楼2013-08-16 16:31:11
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windygo

木虫 (正式写手)

咸蛋超人

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
123彭好好: 金币+1, 有帮助 2013-08-20 17:58:59
楼主别着急,先看是否你的电泳槽正负极接反了;
如果都好着的话,那就看下自己的其他东西有没有配错,比如说电极缓冲液等。
我已经开始怀念那些人,那些事了~
2楼2013-08-16 09:48:13
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123彭好好

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by windygo at 2013-08-16 09:48:13
楼主别着急,先看是否你的电泳槽正负极接反了;
如果都好着的话,那就看下自己的其他东西有没有配错,比如说电极缓冲液等。

电极是没有接反的,我用的电极缓冲配方是:
Tris              3.02g
甘氨酸          14.4g
SDS               1g
水                  1L
我觉得问题应该不出在这里吧?
3楼2013-08-16 12:03:56
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sunnymen

银虫 (正式写手)

hsd3521: 屏蔽内容, 不支持QQ群宣传 2013-08-17 10:21:08
本帖内容被屏蔽

5楼2013-08-16 16:33:22
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