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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 关于克隆表达的问题，急求各位大侠帮忙！！！
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anm0316

金虫 (小有名气)

[求助] 关于克隆表达的问题，急求各位大侠帮忙！！！

想做克隆表达，可是关于克隆表达的一些问题弄不明白，求指导！！！
1、是不是必须把要表达的蛋白的整个开放阅读框插在启动子后面才可以转录？比如，如果用pET28载体，是不是只能插在T7的后面？
2.转录终止子是不是开放阅读框的一部分？
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1楼 2013-08-08 11:32:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
anm0316: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-08-08 15:24:16
转录并不需要把全部阅读框，只要有起始密码子，部分基因序列也可以转录。但如果你做全蛋白的过表达，需要把整个阅读框序列插入。如果你要用T7启动子做过表达，当然只能插在T7启动子下游。一般选合适的限制性内切酶插入载体的多克隆位点。
转录终止子不是ORF的一部分。表达载体的多克隆位点下游一般带有终止子，不需要另行插入。
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2楼2013-08-08 11:49:35
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anm0316

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-08 11:49:35
转录并不需要把全部阅读框，只要有起始密码子，部分基因序列也可以转录。但如果你做全蛋白的过表达，需要把整个阅读框序列插入。如果你要用T7启动子做过表达，当然只能插在T7启动子下游。一般选合适的限制性内切酶插 ...

谢谢！！！
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3楼2013-08-08 15:24:25
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