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zx1990

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[求助] 氨氧化菌扩增结果

这是我做氨氧化菌的PCR结果，功能基因amoA,用的引物是amoA1F和amoA2R，开始做了35个循环，结果条带不明显，我就用第一次的PCR产物进行第二次扩增，循环数减少至20次，20微升体系，结果就这样了，求解释！求解决！

40WEISHENG 2013-07-21 16hr 31min.jpg

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1楼 2013-07-21 20:47:18

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

明显存在非特异扩增，提高退火温度

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2楼2013-07-22 05:57:12

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引用回帖:

2楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-22 05:57:12
明显存在非特异扩增，提高退火温度

这是我做的20μL体系，模板加1μL，第一个是空白，你觉得第二个有条带吗？我觉得很模糊，后来模板量加到2μL，还是很模糊，不知道应该怎样改？另外，这样的条带看起来有非特异性扩增吗？退货温度提高2度后还是这样的

Administrator 2013-07-19 17hr 42min.jpg

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3楼2013-07-22 09:14:51

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【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-23 08:20:51

引用回帖:

3楼: Originally posted by zx1990 at 2013-07-22 09:14:51
这是我做的20μL体系，模板加1μL，第一个是空白，你觉得第二个有条带吗？我觉得很模糊，后来模板量加到2μL，还是很模糊，不知道应该怎样改？另外，这样的条带看起来有非特异性扩增吗？退货温度提高2度后还是这样 ...

一般情况下模板1or2 uL不会有什么不同，关键还是你模板和引物质量，lane2很明显是有条带的，但确实很弱。如果大小与你预期相符合的话，不妨用它做模板在跑一次，30 cycles，如果结果还是很弱的话，说明你引物或者模板是错误的。good luck！

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4楼2013-07-23 00:28:26

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引用回帖:

4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-23 00:28:26
一般情况下模板1or2 uL不会有什么不同，关键还是你模板和引物质量，lane2很明显是有条带的，但确实很弱。如果大小与你预期相符合的话，不妨用它做模板在跑一次，30 cycles，如果结果还是很弱的话，说明你引物或者模 ...

我用它做模板又跑了一次，结果就出现了非特异性扩增，40uL体系，20循环

40WEISHENG 2013-07-21 16hr 31min.jpg

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5楼2013-07-23 08:20:44

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