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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zx1990

金虫 (小有名气)

[求助] 氨氧化菌扩增结果

这是我做氨氧化菌的PCR结果,功能基因amoA,用的引物是amoA1F和amoA2R,开始做了35个循环,结果条带不明显,我就用第一次的PCR产物进行第二次扩增,循环数减少至20次,20微升体系,结果就这样了,求解释!求解决!
氨氧化菌扩增结果
40WEISHENG 2013-07-21 16hr 31min.jpg
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
明显存在非特异扩增,提高退火温度
互助互励,共奋共进!!
2楼2013-07-22 05:57:12
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zx1990

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-22 05:57:12
明显存在非特异扩增,提高退火温度

这是我做的20μL体系,模板加1μL,第一个是空白,你觉得第二个有条带吗?我觉得很模糊,后来模板量加到2μL,还是很模糊,不知道应该怎样改?另外,这样的条带看起来有非特异性扩增吗?退货温度提高2度后还是这样的
氨氧化菌扩增结果-1
Administrator 2013-07-19 17hr 42min.jpg

3楼2013-07-22 09:14:51
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-23 08:20:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by zx1990 at 2013-07-22 09:14:51
这是我做的20μL体系,模板加1μL,第一个是空白,你觉得第二个有条带吗?我觉得很模糊,后来模板量加到2μL,还是很模糊,不知道应该怎样改?另外,这样的条带看起来有非特异性扩增吗?退货温度提高2度后还是这样 ...

一般情况下模板1or2 uL不会有什么不同,关键还是你模板和引物质量,lane2很明显是有条带的,但确实很弱。如果大小与你预期相符合的话,不妨用它做模板在跑一次,30 cycles,如果结果还是很弱的话,说明你引物或者模板是错误的。good  luck!
互助互励,共奋共进!!
4楼2013-07-23 00:28:26
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zx1990

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-23 00:28:26
一般情况下模板1or2 uL不会有什么不同,关键还是你模板和引物质量,lane2很明显是有条带的,但确实很弱。如果大小与你预期相符合的话,不妨用它做模板在跑一次,30 cycles,如果结果还是很弱的话,说明你引物或者模 ...

我用它做模板又跑了一次,结果就出现了非特异性扩增,40uL体系,20循环
氨氧化菌扩增结果-2
40WEISHENG 2013-07-21 16hr 31min.jpg

5楼2013-07-23 08:20:44
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