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blueghost2

新虫 (小有名气)

[求助] 我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因,菌落pcr能p出目的条带,但酶切切不开。

后来知道这两个酶是同尾酶,目的片段连反了。怎么办啊,求指教!!!
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by blueghost2 at 2013-07-17 15:29:17
换酶切位点太麻烦还得重新设计引物。我目前一直在挑斑,希望运气好一点。。...

对于你的挑选,建议用目的基因的引物进行菌体PCR验证,插反就是扩增质粒片段,插正确就是扩增目的基因片段。因为都在同一个载体环上嘛。
4楼2013-07-17 15:41:26
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
blueghost2: 金币+2 2013-07-17 15:29:25
两个建议,1,换酶切位点,2 ,多挑一些克隆子,验证,运气好也可以挑到正确的
2楼2013-07-17 14:29:29
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blueghost2

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-17 14:29:29
两个建议,1,换酶切位点,2 ,多挑一些克隆子,验证,运气好也可以挑到正确的

换酶切位点太麻烦还得重新设计引物。我目前一直在挑斑,希望运气好一点。。
3楼2013-07-17 15:29:17
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blueghost2

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-17 15:41:26
对于你的挑选,建议用目的基因的引物进行菌体PCR验证,插反就是扩增质粒片段,插正确就是扩增目的基因片段。因为都在同一个载体环上嘛。...

我不是说了吗,菌落pcr能p出我的目的条带,但酶切验证却切不出我的目的片段
5楼2013-07-17 17:23:33
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