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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 求助:相对定量qRT-PCR,需要定量mRNA或者cDNA吗?

根据相对地量的原理,我们要的是目的基因和管家基因的ΔCt值,所以不管模版浓度是多少(稀释多少倍),这个ΔCt应该是不变的才对

就算标准组和待测组的模版起始浓度有差异,应该是不会影响到ΔΔCt值才对,因为ΔCt这个值不会受到模版起始浓度的影响


那么做相对定量qRT-PCR的时候,还需要去把各个组的起始RNA或者cDNA浓度搞成一致吗?

本人觉得不需要啊。。。。但是老师说一定要定量RNA,在反转录,然后cDNA稀释相同的倍数做qRT-PCR就可以了

求助:相对定量qRT-PCR,需要定量mRNA或者cDNA吗?

[ Last edited by btx362237729 on 2013-7-4 at 16:41 ]
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人生最黑暗的时光终于过去了
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btx362237729

金虫 (正式写手)

我的天啊。。。。。。。怎么没人回答啊
人生最黑暗的时光终于过去了
2楼2013-07-04 22:00:25
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btx362237729

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 0700901104 at 2013-07-05 09:30:27
2楼说的很有道理,如果反转录的时候用的RNA过多反转录的效率不好,我们使用TaKaRa的荧光用的反转录试剂盒一般20ul体系仅需要1ugRNA就足够了;
对于荧光定量使用相对定量的话之前,目的基因和内参基因的标准曲线条件 ...

再请问一下,扩增效率怎么看的。。。。。
人生最黑暗的时光终于过去了
5楼2013-07-07 18:06:13
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