| 查看: 3405 | 回复: 4 | ||
btx362237729金虫 (正式写手)
|
[求助]
求助：相对定量qRT-PCR，需要定量mRNA或者cDNA吗？
|
|
根据相对地量的原理，我们要的是目的基因和管家基因的ΔCt值，所以不管模版浓度是多少（稀释多少倍），这个ΔCt应该是不变的才对 就算标准组和待测组的模版起始浓度有差异，应该是不会影响到ΔΔCt值才对，因为ΔCt这个值不会受到模版起始浓度的影响  那么做相对定量qRT-PCR的时候，还需要去把各个组的起始RNA或者cDNA浓度搞成一致吗？ 本人觉得不需要啊。。。。但是老师说一定要定量RNA，在反转录，然后cDNA稀释相同的倍数做qRT-PCR就可以了 [ Last edited by btx362237729 on 2013-7-4 at 16:41 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有205人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 简单问题，关于英文缩写的大小写问题的。。
已经有4人回复
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 求解：qPCR & RT-qPCR 的区别
已经有10人回复
- 【求助/交流】RNA质量与qRT-PCR
已经有13人回复
- 【求助/交流】qrt-pcr引物是否要纯化
已经有4人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR
已经有16人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】RNA的提取问题和qRT-PCR分析基因在不同时间的定量表达
已经有10人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】以cDNA序列和mRNA为模板设计引物有什么区别
已经有7人回复
- 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因
已经有13人回复
btx362237729
金虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 927.7
- 散金: 74
- 红花: 3
- 帖子: 745
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1069351
- 注册: 2010-08-04
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
2楼2013-07-04 22:00:25
niil
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 6673.5
- 红花: 3
- 帖子: 835
- 在线: 233.2小时
- 虫号: 876426
- 注册: 2009-10-18
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
3楼2013-07-05 08:56:24
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-05 09:49:17
btx362237729: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常感谢！！！！！！ 2013-07-07 18:06:41
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-05 09:49:17
btx362237729: 金币+10, ★★★很有帮助, 非常感谢！！！！！！ 2013-07-07 18:06:41
|
2楼说的很有道理，如果反转录的时候用的RNA过多反转录的效率不好，我们使用TaKaRa的荧光用的反转录试剂盒一般20ul体系仅需要1ugRNA就足够了； 对于荧光定量使用相对定量的话之前，目的基因和内参基因的标准曲线条件要摸索好，效率越接近100%越好，不行就95%-105%也可以接受。然后将你的模板稀释后一起跑目的基因和内参基因。 |
4楼2013-07-05 09:30:27
btx362237729
金虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 927.7
- 散金: 74
- 红花: 3
- 帖子: 745
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1069351
- 注册: 2010-08-04
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
再请问一下，扩增效率怎么看的。。。。。 5楼2013-07-07 18:06:13
