| 查看: 1060 | 回复: 0 | ||
[求助]
请教DNA电泳问题，使用SYBR Green I 染色
|
|
请教DNA电泳问题，使用SYBR Green I 染色 我的操作简述如下： 1、2%低熔点琼脂糖100ml，加热后放凉到60度时，加入SYBR Green I 原液10ul，混匀后制胶。 2、将样品和loading buffer 按常规比例体积混合，10min后上样。 3、上样体积10ul，我的样品浓度约在200 nM。 4、电泳条件：70V（7V/cm），0.5 TBE Buffer，冰水浴电泳，3h。 5、我设了两个Ladder，一个范围是49kb~0.8kb，另一个范围是500bp~25bp。 这个实验重复了两层，结果类似，都好像有问题： 1、在电泳开始不久就发现样品条带有黄绿色带条出现，电泳结束是黄绿色带条变的很粗（信号强）。 2、目的条带和Ladder情况： （1）M1 范围是49kb~0.8kb的Ladder 没有分离开，只出现3条带。 （2）M2范围是500bp~25bp的Ladder 有分开，但信号很弱（可能是我的上样浓度小了）。 （3）我的目的条带都应该在23kb附近，但是电泳结果信号都处于50bp，而且条带间横向没有分开，全连在一起了。 （4）我的目的条带理论上应该有梯带出现，但是没有出现。 说明：我的实验是用若干条序列彼此部分互补的50bp的单链DNA作为原料，通过缓慢淬火，使之形成DNA纳米结构，目标产物大小应该在23kb。 我的疑问是： 1、我的实验设计是不是有问题，根本没有形成纳米结构，所以电泳结果条带仍然是50bp，与原料很近。 2、是不是SYBR Green I 制胶的方法有误，不应该将SYBR Green I 直接加到胶里，而应该和样品预混后再上样才好。 3、是不是我的上样体积或样品浓度太大? 谢谢，希望得到高手指教。  20130628_2208.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有81人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
RNA提取及电泳问题（附图），虫友们能否帮我分析下啊~~
已经有15人回复
- 关于PAGE电泳的求助
已经有12人回复
- 琼脂糖凝胶电泳哪种染料能取代EB
已经有22人回复
- EB染色DNA电泳实验，溴酚蓝孔道出现亮条带
已经有14人回复
- 染色剂的浓度对DNA电泳亮度有多大影响
已经有5人回复
- 求问一种能够区分单双链DNA的试剂
已经有5人回复
- 一份DNA样品，如何判断是单链，还是双链？
已经有3人回复
- 菌液PCR验证
已经有8人回复
- 求助高手分析DGGE图谱，附PCR图和DGGE图谱
已经有6人回复
- 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
已经有20人回复
- 电泳用和PCR用的SYBR Green I有什么区别
已经有5人回复
- 求助DGGE染色问题
已经有20人回复
- 【求助/交流】急！！！琼脂糖凝胶电泳的问题，跑不出条带了！！
已经有8人回复
- 【求助/交流】琼脂糖凝胶电泳时用SYBR Green I染色， 初染好还是后染好？
已经有3人回复
- 【求助/交流】DGGE遇到了难题，向大家求助！
已经有10人回复
- 【求助/交流】推荐电泳时EB的替代品？
已经有11人回复
- 【求助/交流】请教DGGE电泳图
已经有7人回复
- 【求助】ConA-Sepharose 4B装柱的操作步骤
已经有4人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
30