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镍柱再生问题
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由于镍柱使用比较久了，平时也只是一般再生，并没有彻底再生过。近期填料有点变成棕灰色了，想彻底再生一下，请问一下，彻底再生时，第一步需要使用再生缓冲液6M Gu-HCl，0.2M醋酸，但是实验室没有盐酸胍，不知道可不可以使用其他东西代替。 第 步1 2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸） 第 步2 5倍体积水 第 步3 3倍体积2% SDS 第 步4 1倍体积25%乙醇 第 步5 1倍体积50%乙醇 第 步6 1倍体积75%乙醇 第 步7 5倍体积100%乙醇 第 步8 1倍体积75%乙醇 第 步9 1倍体积50%乙醇 第 步 10 1倍体积25%乙醇 第 步 11 1倍体积水 第 步 12 5倍体积100mM EDTA，pH8.0 第 步 13 10倍体积水 第 步 14 2倍体积100mM NiSO 4 第 步 15 2倍体积水 第 步 16 2倍体积再生缓冲液 第 步 17 2倍体积适合的缓冲液平衡（例如1×Ni-NTA结合缓冲液，buffer A或buffer B） 这是说明书上的再生方法，不知道用到盐酸胍的那两步能不能用其他东西代替 [ Last edited by 1949stone on 2013-6-14 at 08:24 ] |
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6楼2013-06-13 23:02:15
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| 没用过盐酸胍。我是用2%的SDS洗，然后再用梯度乙醇洗。彻底去掉镍离子可以用100mM EDTA洗脱后重新装。 |
2楼2013-06-13 10:59:35
1949stone: 按照说明书一般不会有他太大问题 你可以问问供应商 2013-06-14 08:24:37
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第 步1 2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸） 第 步2 5倍体积水 第 步3 3倍体积2% SDS 第 步4 1倍体积25%乙醇 第 步5 1倍体积50%乙醇 第 步6 1倍体积75%乙醇 第 步7 5倍体积100%乙醇 第 步8 1倍体积75%乙醇 第 步9 1倍体积50%乙醇 第 步 10 1倍体积25%乙醇 第 步 11 1倍体积水 第 步 12 5倍体积100mM EDTA，pH8.0 第 步 13 10倍体积水 第 步 14 2倍体积100mM NiSO 4 第 步 15 2倍体积水 第 步 16 2倍体积再生缓冲液 第 步 17 2倍体积适合的缓冲液平衡（例如1×Ni-NTA结合缓冲液，buffer A或buffer B） 这是说明书上的再生方法，不知道用到盐酸胍的那两步能不能用其他东西代替 |
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