| 查看: 5286 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
镍柱再生问题
|
|||
|
由于镍柱使用比较久了，平时也只是一般再生，并没有彻底再生过。近期填料有点变成棕灰色了，想彻底再生一下，请问一下，彻底再生时，第一步需要使用再生缓冲液6M Gu-HCl，0.2M醋酸，但是实验室没有盐酸胍，不知道可不可以使用其他东西代替。 第 步1 2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸） 第 步2 5倍体积水 第 步3 3倍体积2% SDS 第 步4 1倍体积25%乙醇 第 步5 1倍体积50%乙醇 第 步6 1倍体积75%乙醇 第 步7 5倍体积100%乙醇 第 步8 1倍体积75%乙醇 第 步9 1倍体积50%乙醇 第 步 10 1倍体积25%乙醇 第 步 11 1倍体积水 第 步 12 5倍体积100mM EDTA，pH8.0 第 步 13 10倍体积水 第 步 14 2倍体积100mM NiSO 4 第 步 15 2倍体积水 第 步 16 2倍体积再生缓冲液 第 步 17 2倍体积适合的缓冲液平衡（例如1×Ni-NTA结合缓冲液，buffer A或buffer B） 这是说明书上的再生方法，不知道用到盐酸胍的那两步能不能用其他东西代替 [ Last edited by 1949stone on 2013-6-14 at 08:24 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有148人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 纯化蛋白时关于溶液中咪唑的问题
已经有7人回复
- 纯化不到His-tag融合蛋白，镍柱求教
已经有32人回复
- 镍柱纯化中再生后柱子变白，什么问题？
已经有22人回复
- 蛋白纯化实验用柱子的维护问题？
已经有7人回复
- 求南京大学国基名单
已经有5人回复
- 关于镍柱纯化蛋白
已经有10人回复
- 关于Ni-NTA纯化蛋白
已经有19人回复
- 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
已经有10人回复
- 重组蛋白结合不到ni柱上
已经有24人回复
- 【求助】粉体过滤设备
已经有2人回复
- 【求助/交流】镍柱纯化，洗不下来啊。。。
已经有25人回复
- 【求助/交流】Ni柱洗脱蛋白
已经有6人回复
- 2010年度国家科学技术奖初评结果公布
已经有9人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
1949stone: 按照说明书一般不会有他太大问题 你可以问问供应商 2013-06-14 08:24:37
|
第 步1 2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸） 第 步2 5倍体积水 第 步3 3倍体积2% SDS 第 步4 1倍体积25%乙醇 第 步5 1倍体积50%乙醇 第 步6 1倍体积75%乙醇 第 步7 5倍体积100%乙醇 第 步8 1倍体积75%乙醇 第 步9 1倍体积50%乙醇 第 步 10 1倍体积25%乙醇 第 步 11 1倍体积水 第 步 12 5倍体积100mM EDTA，pH8.0 第 步 13 10倍体积水 第 步 14 2倍体积100mM NiSO 4 第 步 15 2倍体积水 第 步 16 2倍体积再生缓冲液 第 步 17 2倍体积适合的缓冲液平衡（例如1×Ni-NTA结合缓冲液，buffer A或buffer B） 这是说明书上的再生方法，不知道用到盐酸胍的那两步能不能用其他东西代替 |
3楼2013-06-13 11:08:42
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuzhe2240(myprayer代发): 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:41:48
xuzhe2240: 金币+18, ★★★★★最佳答案 2013-06-14 09:43:54
感谢参与，应助指数 +1
xuzhe2240(myprayer代发): 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:41:48
xuzhe2240: 金币+18, ★★★★★最佳答案 2013-06-14 09:43:54
| 没用过盐酸胍。我是用2%的SDS洗，然后再用梯度乙醇洗。彻底去掉镍离子可以用100mM EDTA洗脱后重新装。 |
2楼2013-06-13 10:59:35
yanfang2012
木虫 (著名写手)
- 应助: 47 (小学生)
- 金币: 2878.9
- 散金: 174
- 红花: 8
- 帖子: 1203
- 在线: 158.6小时
- 虫号: 1925616
- 注册: 2012-08-05
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
4楼2013-06-13 11:30:09
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
5楼2013-06-13 12:46:56
