应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 镍柱再生问题
81/1返回列表
查看: 5283  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xuzhe2240

银虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱再生问题

由于镍柱使用比较久了，平时也只是一般再生，并没有彻底再生过。近期填料有点变成棕灰色了，想彻底再生一下，请问一下，彻底再生时，第一步需要使用再生缓冲液6M Gu-HCl，0.2M醋酸，但是实验室没有盐酸胍，不知道可不可以使用其他东西代替。

第 步1    2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸）
第 步2    5倍体积水
第 步3    3倍体积2% SDS
第 步4    1倍体积25%乙醇
第 步5    1倍体积50%乙醇
第 步6    1倍体积75%乙醇
第 步7    5倍体积100%乙醇
第 步8    1倍体积75%乙醇
第 步9    1倍体积50%乙醇
第 步 10    1倍体积25%乙醇
第 步 11    1倍体积水
第 步 12    5倍体积100mM EDTA，pH8.0
第 步 13    10倍体积水
第 步 14    2倍体积100mM NiSO 4  
第 步 15    2倍体积水
第 步 16    2倍体积再生缓冲液
第 步 17    2倍体积适合的缓冲液平衡（例如1×Ni-NTA结合缓冲液，buffer A或buffer B）
这是说明书上的再生方法，不知道用到盐酸胍的那两步能不能用其他东西代替

[ Last edited by 1949stone on 2013-6-14 at 08:24 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-13 10:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuzhe2240(myprayer代发): 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:41:48
xuzhe2240: 金币+18, ★★★★★最佳答案 2013-06-14 09:43:54
没用过盐酸胍。我是用2%的SDS洗，然后再用梯度乙醇洗。彻底去掉镍离子可以用100mM EDTA洗脱后重新装。
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-13 10:59:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhe2240

银虫 (初入文坛)
1949stone: 按照说明书一般不会有他太大问题 你可以问问供应商 2013-06-14 08:24:37
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-13 10:59:35
没用过盐酸胍。我是用2%的SDS洗，然后再用梯度乙醇洗。彻底去掉镍离子可以用100mM EDTA洗脱后重新装。

第 步1    2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸）
第 步2    5倍体积水
第 步3    3倍体积2% SDS
第 步4    1倍体积25%乙醇
第 步5    1倍体积50%乙醇
第 步6    1倍体积75%乙醇
第 步7    5倍体积100%乙醇
第 步8    1倍体积75%乙醇
第 步9    1倍体积50%乙醇
第 步 10    1倍体积25%乙醇
第 步 11    1倍体积水
第 步 12    5倍体积100mM EDTA，pH8.0
第 步 13    10倍体积水
第 步 14    2倍体积100mM NiSO 4  
第 步 15    2倍体积水
第 步 16    2倍体积再生缓冲液
第 步 17    2倍体积适合的缓冲液平衡（例如1×Ni-NTA结合缓冲液，buffer A或buffer B）
这是说明书上的再生方法，不知道用到盐酸胍的那两步能不能用其他东西代替
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-13 11:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuzhe2240(myprayer代发): 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:41:58
xuzhe2240: 金币+5 2013-06-14 09:43:40
我的也没有用盐酸胍，只用了磷酸盐、氯化钠和EDTA
赞一下 回复此楼
believe yourself！
4楼2013-06-13 11:30:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-13 19:28:44
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuzhe2240 at 2013-06-13 11:08:42
第 步1    2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸）
第 步2    5倍体积水
第 步3    3倍体积2% SDS
第 步4    1倍体积25%乙醇
第 步5    1倍体积50%乙醇
第 步6    1倍体积75%乙醇
第 步7    5倍体积 ...

我的方法中没有用盐酸胍，其它的步骤和你说的差不多。盐酸胍的作用主要是变性蛋白，增强疏水蛋白的溶解度。我觉得除非是柱子非常脏，一般用SDS就可以了。我不知道你的第16步为什么还要用盐酸胍，因为洗好的柱子应该是干净的。
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-13 12:46:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuding6

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuzhe2240: 金币+5, ★有帮助 2013-06-14 09:43:33
可以不用盐酸胍，先用0.2CV 0.1MEDTA去除镍离子，再用5CV dH2O冲洗，再用4CV 1M NaOH去除杂蛋白。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-06-13 23:02:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

欧阳-90

银虫 (小有名气)
那个SDS是必须使用的吗？
赞一下 回复此楼
7楼2013-06-14 22:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpl0

新虫 (初入文坛)
再生的时候镍盐溶液用不用过滤

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-06-14 16:45:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xuzhe2240 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 308求调剂 +4 墨墨漠 2026-03-25 4/200 2026-03-25 20:32 by 热情沙漠
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +3 地球绕着太阳转 2026-03-23 3/150 2026-03-25 19:10 by 雾散后相遇lc
[考研] 材料与化工 322求调剂 +6 然11 2026-03-19 6/300 2026-03-25 18:37 by haxia
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭