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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 镍柱再生问题
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xuzhe2240

银虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱再生问题

由于镍柱使用比较久了，平时也只是一般再生，并没有彻底再生过。近期填料有点变成棕灰色了，想彻底再生一下，请问一下，彻底再生时，第一步需要使用再生缓冲液6M Gu-HCl，0.2M醋酸，但是实验室没有盐酸胍，不知道可不可以使用其他东西代替。

第 步1    2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸）
第 步2    5倍体积水
第 步3    3倍体积2% SDS
第 步4    1倍体积25%乙醇
第 步5    1倍体积50%乙醇
第 步6    1倍体积75%乙醇
第 步7    5倍体积100%乙醇
第 步8    1倍体积75%乙醇
第 步9    1倍体积50%乙醇
第 步 10    1倍体积25%乙醇
第 步 11    1倍体积水
第 步 12    5倍体积100mM EDTA，pH8.0
第 步 13    10倍体积水
第 步 14    2倍体积100mM NiSO 4  
第 步 15    2倍体积水
第 步 16    2倍体积再生缓冲液
第 步 17    2倍体积适合的缓冲液平衡（例如1×Ni-NTA结合缓冲液，buffer A或buffer B）
这是说明书上的再生方法，不知道用到盐酸胍的那两步能不能用其他东西代替

[ Last edited by 1949stone on 2013-6-14 at 08:24 ]
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1楼 2013-06-13 10:50:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xuzhe2240(myprayer代发): 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:41:48
xuzhe2240: 金币+18, ★★★★★最佳答案 2013-06-14 09:43:54
没用过盐酸胍。我是用2%的SDS洗，然后再用梯度乙醇洗。彻底去掉镍离子可以用100mM EDTA洗脱后重新装。
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2楼2013-06-13 10:59:35
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xuzhe2240

银虫 (初入文坛)
1949stone: 按照说明书一般不会有他太大问题 你可以问问供应商 2013-06-14 08:24:37
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-13 10:59:35
没用过盐酸胍。我是用2%的SDS洗，然后再用梯度乙醇洗。彻底去掉镍离子可以用100mM EDTA洗脱后重新装。

第 步1    2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸）
第 步2    5倍体积水
第 步3    3倍体积2% SDS
第 步4    1倍体积25%乙醇
第 步5    1倍体积50%乙醇
第 步6    1倍体积75%乙醇
第 步7    5倍体积100%乙醇
第 步8    1倍体积75%乙醇
第 步9    1倍体积50%乙醇
第 步 10    1倍体积25%乙醇
第 步 11    1倍体积水
第 步 12    5倍体积100mM EDTA，pH8.0
第 步 13    10倍体积水
第 步 14    2倍体积100mM NiSO 4  
第 步 15    2倍体积水
第 步 16    2倍体积再生缓冲液
第 步 17    2倍体积适合的缓冲液平衡（例如1×Ni-NTA结合缓冲液，buffer A或buffer B）
这是说明书上的再生方法，不知道用到盐酸胍的那两步能不能用其他东西代替
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3楼2013-06-13 11:08:42
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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xuzhe2240(myprayer代发): 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-13 13:41:58
xuzhe2240: 金币+5 2013-06-14 09:43:40
我的也没有用盐酸胍，只用了磷酸盐、氯化钠和EDTA
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believe yourself！
4楼2013-06-13 11:30:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-13 19:28:44
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuzhe2240 at 2013-06-13 11:08:42
第 步1    2倍体积再生缓冲液（6M Gu-HCl，0.2M醋酸）
第 步2    5倍体积水
第 步3    3倍体积2% SDS
第 步4    1倍体积25%乙醇
第 步5    1倍体积50%乙醇
第 步6    1倍体积75%乙醇
第 步7    5倍体积 ...

我的方法中没有用盐酸胍，其它的步骤和你说的差不多。盐酸胍的作用主要是变性蛋白，增强疏水蛋白的溶解度。我觉得除非是柱子非常脏，一般用SDS就可以了。我不知道你的第16步为什么还要用盐酸胍，因为洗好的柱子应该是干净的。
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5楼2013-06-13 12:46:56
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fuding6

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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xuzhe2240: 金币+5, ★有帮助 2013-06-14 09:43:33
可以不用盐酸胍，先用0.2CV 0.1MEDTA去除镍离子，再用5CV dH2O冲洗，再用4CV 1M NaOH去除杂蛋白。
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6楼2013-06-13 23:02:15
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欧阳-90

银虫 (小有名气)
那个SDS是必须使用的吗？
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7楼2013-06-14 22:16:24
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lpl0

新虫 (初入文坛)
再生的时候镍盐溶液用不用过滤

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8楼2017-06-14 16:45:02
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