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776142

金虫 (正式写手)

[交流] DNA电泳图分析求助

跑了很多次从DH5a大肠杆菌中用合成的萃取材料分离出的DNA电泳，总是出现问题，操作是按照碱法裂解的方法配制溶液1,2,3同时在1中加入RNA酶，然后用合成的材料吸附洗脱，但在200处左右总出现很亮的条带，加大RNA酶的浓度也无法解决，并且跑出的DNA条带与试剂盒得到的最亮条带也不在一条直线上，不知道是不是我用1M的NaCl洗脱后的结果，希望明白的朋友们能够帮忙解决下，不尽感激。
DNA电泳图分析求助
图片3.jpg



[ Last edited by 776142 on 2013-5-21 at 10:02 ]
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1楼 2013-05-21 10:00:50
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weithermo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
The bright band should be RNA. If you use the solution 1 from the kit to replace your solution 1, you may see the bright RNA band disappear. If this is the case, your solution 1 does not contain good RNase. But my question for you is why you want to use the manual alkaline lysis method not using the plasmid prep kit? It is only 1.2 RMB per prep in the market. Would it be better to spend your time somewhere else rather than do constant troubleshooting? Qiagen and Thermo Fisher Scientific and many others provide good quality kits. If you think they are expensive, you can try the ones made locally. It is important to save your time.
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29楼2013-08-28 01:21:05
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youngker918

金虫 (正式写手)
★ ★
776142(金币+1): 谢谢参与
776142(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-21 13:18:57
有可能啊，建议你氯化钠洗脱后再做下脱盐
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3楼2013-05-21 10:49:53
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孤城一片

木虫 (小有名气)
★ ★
776142(金币+1): 谢谢参与
776142(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-22 00:59:58
我以前做的时候也是这样，我一开始也是RNA酶加的量很大，后来我一般是大提，然后做一次回收，效果还行
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6楼2013-05-21 14:04:21
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by youngker918 at 2013-05-21 10:49:53
有可能啊，建议你氯化钠洗脱后再做下脱盐

能告诉下具体的除盐过程吗，刚接触这一领域不太懂，谢谢。我是用300微升的1M氯化钠洗脱的，
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7楼2013-05-21 14:17:39
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