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776142

金虫 (正式写手)

[交流] DNA电泳图分析求助

跑了很多次从DH5a大肠杆菌中用合成的萃取材料分离出的DNA电泳，总是出现问题，操作是按照碱法裂解的方法配制溶液1,2,3同时在1中加入RNA酶，然后用合成的材料吸附洗脱，但在200处左右总出现很亮的条带，加大RNA酶的浓度也无法解决，并且跑出的DNA条带与试剂盒得到的最亮条带也不在一条直线上，不知道是不是我用1M的NaCl洗脱后的结果，希望明白的朋友们能够帮忙解决下，不尽感激。
DNA电泳图分析求助
图片3.jpg



[ Last edited by 776142 on 2013-5-21 at 10:02 ]
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1楼 2013-05-21 10:00:50
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field0073

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-27 22:27:12
引用回帖:
19楼: Originally posted by huoyongting at 2013-05-22 15:20:35
RNA酶的作用时间可以长一点或者买好一点的RNA酶，然后如果是异丙醇加的量太多的话也会有RNA污染的，跟试剂盒相比的话你的条带大部分是线性化的了，可能是你加二液的时候混匀的过于剧烈了，这个注意下就好了，祝好运

200bp的条带应该不是RNA，首先RNA容易降解，图谱中如果是RNA应该很弥散，而不是这么均一（虽然也模糊）；再者，已经用RNA酶处理过，楼上有人说RNA酶可能失活，其实RNA酶很难灭活，并且酶活力较高，所以很有可能不是RNA. 我比较同意16楼说的，可能在提取过程中震荡剧烈导致DNA断裂，并且图片也说明你的目的条带与试剂盒上所给不一致，再次做的时候不要震混，多次颠倒混匀即可。
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22楼2013-05-22 22:32:50
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youngker918

金虫 (正式写手)
★ ★
776142(金币+1): 谢谢参与
776142(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-21 13:18:57
有可能啊，建议你氯化钠洗脱后再做下脱盐
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3楼2013-05-21 10:49:53
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孤城一片

木虫 (小有名气)
★ ★
776142(金币+1): 谢谢参与
776142(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-22 00:59:58
我以前做的时候也是这样，我一开始也是RNA酶加的量很大，后来我一般是大提，然后做一次回收，效果还行
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6楼2013-05-21 14:04:21
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by youngker918 at 2013-05-21 10:49:53
有可能啊，建议你氯化钠洗脱后再做下脱盐

能告诉下具体的除盐过程吗，刚接触这一领域不太懂，谢谢。我是用300微升的1M氯化钠洗脱的，
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7楼2013-05-21 14:17:39
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