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guoquan5001金虫 (小有名气)
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[交流]
蛋白质纯化经验指南
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求助，我有一段小分子量的蛋白，5KD 左右，4 对二硫键，诱导表达后以包涵体形式存在，请问，我怎么设计我的纯化步骤？我用过离子交换柱，纯度可以达60%，但是不知道下边该怎么做？望赐教! 我用的 pET-3C 的载体，BL21 表达你好，我做复性不多，你可以依据有关有多对 4 对二硫键的蛋白复性的原理看这方面的文献，我看一般有不少用谷胱甘肽氧化型和还原型配比做的，还有用分子伴侣，你可以 多看看再尝试：）至于纯化，如果你的蛋白有游离的巯基，那我觉得很时候用以前的共价层析，专门对于巯基进行纯化，那填料叫 71-7105-00 Thiopropyl Sepharose 6B 不知道现在还有没有这个填料，你可以问 pHarmacia 公司的人。你 pM 给我，我可以把这个材料发给你，如果没有，那你只好用离子交换，凝胶过滤，你的既然抗菌，你知道是什么原理，作用于什么部位，和什么结合，那也许可以用亲和的方法，我觉得以前说抗生素有的需要疏水结构，你也可以用疏水试试。同时是包涵你可以先把包涵体溶解，然后降低变性剂的浓度，这样类似分级沉淀，你就可以得到很纯的包涵体，再纯化就容易了，总之我建议你先分级沉淀包涵体，再做纯化。这样省事点。 |
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2013-05-17 19:04:50, 1.49 M
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2楼2013-05-17 19:12:10
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