| 查看: 905 | 回复: 1 | |||
guoquan5001金虫 (小有名气)
|
[交流]
蛋白质纯化经验指南
|
|
求助，我有一段小分子量的蛋白，5KD 左右，4 对二硫键，诱导表达后以包涵体形式存在，请问，我怎么设计我的纯化步骤？我用过离子交换柱，纯度可以达60%，但是不知道下边该怎么做？望赐教! 我用的 pET-3C 的载体，BL21 表达你好，我做复性不多，你可以依据有关有多对 4 对二硫键的蛋白复性的原理看这方面的文献，我看一般有不少用谷胱甘肽氧化型和还原型配比做的，还有用分子伴侣，你可以 多看看再尝试：）至于纯化，如果你的蛋白有游离的巯基，那我觉得很时候用以前的共价层析，专门对于巯基进行纯化，那填料叫 71-7105-00 Thiopropyl Sepharose 6B 不知道现在还有没有这个填料，你可以问 pHarmacia 公司的人。你 pM 给我，我可以把这个材料发给你，如果没有，那你只好用离子交换，凝胶过滤，你的既然抗菌，你知道是什么原理，作用于什么部位，和什么结合，那也许可以用亲和的方法，我觉得以前说抗生素有的需要疏水结构，你也可以用疏水试试。同时是包涵你可以先把包涵体溶解，然后降低变性剂的浓度，这样类似分级沉淀，你就可以得到很纯的包涵体，再纯化就容易了，总之我建议你先分级沉淀包涵体，再做纯化。这样省事点。 |
回复此楼» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 蛋白纯化经验指南.pdf
2013-05-17 19:04:50, 1.49 M
» 猜你喜欢
不自信的我
已经有5人回复
-
磺酰氟产物，毕不了业了！
已经有4人回复
-
论文终于录用啦！满足毕业条件了
已经有16人回复
-
求个博导看看
已经有19人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做蛋白质纯化 该怎么脱盐
已经有6人回复
- 蛋白表达及纯化
已经有29人回复
- 高表达蛋白纯化手册QIAGEN
已经有100人回复
- 请大家帮忙分析蛋白纯化的结果
已经有23人回复
- 蛋白质的重要性质，蛋白质性质实验，蛋白质手册及纯化手册，蛋白质电泳实验技术
已经有229人回复
- 冷泉港---《蛋白质纯化及实验指南》
已经有395人回复
- 要做蛋白纯化了，求高手指教注意细节
已经有8人回复
- 蛋白纯化遇到问题
已经有22人回复
- 蛋白质纯化凝胶层析
已经有9人回复
- 蛋白质纯化与鉴定实验指南[l冷泉港]中译本
已经有661人回复
- gst标签，蛋白纯化
已经有25人回复
- 蛋白纯化分离问题
已经有19人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
已经有9人回复
- 【分享】蛋白质纯化个人总结2
已经有38人回复
- 【分享】【搜索无重复】精编蛋白质科学实验指南---下载
已经有43人回复
0.8
| 顶一下，感谢分享！ |
2楼2013-05-17 19:12:10