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Francis_zw

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 平板能长，挑单克隆却不长啊啊啊啊啊

小弟刚做的转化，平板长的很好，挑取单克隆到5ml LB中培养，长势不错，但后几次却不行（一个礼拜内），后有虫友说是杂菌污染了平板，那么我再次把上次做转化的EP管拿出来取100ul 涂布在Amp 100ug/ml的平板上（调大筛选压力），待平板长好后，昨天晚上挑单克隆到5ml LB 中，今天早上还是澄清，我晕，出了鬼了，这是？~

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1楼 2013-05-04 16:27:26

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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

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专业: 病原细菌、细菌感染与宿主

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-27 17:01:09

我一般用150的Amp浓度，而且Amp容易失活，平板最好不要放置时间太长。如你所述，涂板得到的克隆没有用菌落PCR或者普通PCR进行验证么？容易出现假阳性的克隆。

赞一下(1人)

我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。

5楼2013-05-05 13:04:31

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