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cqqxmc

新虫 (小有名气)

[求助] western与抗体

各位高手：
我用同一种自制的抗体做了ELISA和western,
其中ELISA中该抗体可以正常检测样品带毒率；
但在western中却杂不出目的条带。（样品为带毒的昆虫或植物）
       不知道是不是因为蛋白变性后不能被该抗体识别？
       求分析！求解决办法！
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1楼 2013-05-03 17:07:20
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guxinhan123

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cqqxmc(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 01:33:50
cqqxmc: 金币+1, ★有帮助 2013-05-04 13:53:00
能做ELISA不能做western正常的，优化下wb的条件，应该是抗体的问题，加大抗体用量和上样量，先不管杂带，如果还是不能用就果断换抗体吧
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2楼2013-05-03 21:58:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cqqxmc(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 01:34:00
cqqxmc: 金币+1, ★有帮助 2013-05-04 13:53:24
抗体一般是识别蛋白表面的抗原决定簇，一般在变性条件下识别效果会更好。有的抗体在native条件下反而识别不理想。此外，你自制的抗体没有做western如何判断抗体的特异性？
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3楼2013-05-04 00:50:37
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cqqxmc

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-04 00:50:37
抗体一般是识别蛋白表面的抗原决定簇，一般在变性条件下识别效果会更好。有的抗体在native条件下反而识别不理想。此外，你自制的抗体没有做western如何判断抗体的特异性？

抗体是从别的实验室要来的
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4楼2013-05-04 13:53:56
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cqqxmc

新虫 (小有名气)
今天又换了一种抗体，终于杂出了条带
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5楼2013-05-04 14:28:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
cqqxmc: 金币+1, ★有帮助 2013-05-07 16:54:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by cqqxmc at 2013-05-04 13:53:56
抗体是从别的实验室要来的...

那他们肯定做过western的，你可以问一下稀释建议，然后自己再根据实验室条件优化一下。
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6楼2013-05-05 01:54:06
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