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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 有精通HPLC的虫虫吗
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chenhw06

金虫 (正式写手)

[交流] 有精通HPLC的虫虫吗

有没有对高效液相比较精通的亲啊，接触时间不长，好多都不了解，有比较精通的虫虫给我个QQ吧，平时好请教啊。感谢啊！！！比如下面这个，我做的标曲是在v=1的时候做的（C8，紫外，乙腈：水=2:1），结果跑出来峰（t=1.54，v=1）没有分开，不知道怎么积分，后来把流速调低至0.7和0.5，感觉积出来的峰面积也不会准，感觉把杂峰的面积也积进去了。求QQ，求赐教！

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1楼 2013-05-02 16:27:07
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badgv

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你就不在同一个条件下进一针空白看下先吗？先确定空白溶剂锋的位置情况啊
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25楼2013-05-03 15:39:58
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普通回帖

staffyujay

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chenhw06: 金币+1 2013-05-02 16:58:18
这么早出峰不是都和溶剂峰混在一起了，而且响应也不高啊~这是溶剂峰吧。。。。
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2楼2013-05-02 16:45:58
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by staffyujay at 2013-05-02 16:45:58
这么早出峰不是都和溶剂峰混在一起了，而且响应也不高啊~这是溶剂峰吧。。。。

不是吧，保留就是比较弱的，之前测的标样就是出峰很快。。。
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3楼2013-05-02 16:49:56
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thankroc91

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chenhw06: 金币+2 2013-05-02 17:03:54
响应值很大，不知波长多少？保留时间靠前考虑卤素离子峰
这样这能手动积分，平行性看你自己功力了，
如果波长合适，流动相增加缓冲盐。。调整至接近待测溶液PH或者缓冲盐溶配
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4楼2013-05-02 16:58:31
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by thankroc91 at 2013-05-02 16:58:31
响应值很大，不知波长多少？保留时间靠前考虑卤素离子峰
这样这能手动积分，平行性看你自己功力了，
如果波长合适，流动相增加缓冲盐。。调整至接近待测溶液PH或者缓冲盐溶配

278nm，我的样里面不含卤素离子。后面的我就看不太懂了，想问问0.5的那个算分开了吗？流速为1的手动积分有问题吗？
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5楼2013-05-02 17:03:43
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chenhw06

金虫 (正式写手)
吃饭去了，虫虫们的帮帮忙嘛
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6楼2013-05-02 17:17:13
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swallow13

禁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chenhw06: 金币+1 2013-05-02 23:32:56
本帖内容被屏蔽
7楼2013-05-02 17:38:12
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by swallow13 at 2013-05-02 17:38:12
液相方法有问题 五个峰之间没有分开 筛选一下方法吧

筛选方法。。。吐血了。。，是流速、温度、流动相这几方面调试吗？能不能给个QQ哪，假如不介意的话。
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8楼2013-05-02 18:35:34
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饿到天明

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chenhw06: 金币+2 2013-05-02 21:03:48
进样浓度太高了，峰都平头了，你的仪器不能走梯度么？恒流分相近的杂质没有优势，峰又宽，分离度又不好。你可以把结构式发出来看看。该用什么流动相和柱子
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9楼2013-05-02 19:12:43
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 饿到天明 at 2013-05-02 19:12:43
进样浓度太高了，峰都平头了，你的仪器不能走梯度么？恒流分相近的杂质没有优势，峰又宽，分离度又不好。你可以把结构式发出来看看。该用什么流动相和柱子

可以走梯度，只是我没有走过，液相刚买来没太久，实验室的的都不是很懂。我的目标物是第一个峰啊，浓度已经很低了，查阅文献都只是说到用的是C8柱，具体条件没有说。前面两个大峰应该就是这两个东西了，同分异构体。

DPA.jpg



未命名.jpg
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10楼2013-05-02 19:49:13
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zly86

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chenhw06: 金币+2 2013-05-02 21:04:13
保留太弱了，需要增加保留，将样品峰和系统峰分开才能做定量结果，否则是不准确的。
增加保留的方法：
1.降低流动相中乙腈含量，你的乙腈含量太高（66.7%），试试从5%到50%乙腈，30分钟的梯度，另外，建议不要用纯水，用0.1%FA做弱洗脱剂，你的样品中含酚羟基，水做流动相或许会出现拖尾等情况；
2.换C18柱试试，疏水性强的多。
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11楼2013-05-02 20:58:21
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zly86 at 2013-05-02 20:58:21
保留太弱了，需要增加保留，将样品峰和系统峰分开才能做定量结果，否则是不准确的。
增加保留的方法：
1.降低流动相中乙腈含量，你的乙腈含量太高（66.7%），试试从5%到50%乙腈，30分钟的梯度，另外，建议不要用纯 ...

好的，我明天做一个梯度试试去，不过我看的所有文献都是C8，要改吗？？
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12楼2013-05-02 21:06:09
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mayanshun

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chenhw06: 金币+2 2013-05-02 23:32:36
你的样品极性很大，而分离模式是反相色谱，从而样品几乎没有保留。流速改变效果不佳。建议：仍然采用C8，而流动相中添加三氟乙酸或醋酸，抑制样品的电离；或采用阴离子交换色谱模式分离分析。
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13楼2013-05-02 22:27:36
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by mayanshun at 2013-05-02 22:27:36
你的样品极性很大，而分离模式是反相色谱，从而样品几乎没有保留。流速改变效果不佳。建议：仍然采用C8，而流动相中添加三氟乙酸或醋酸，抑制样品的电离；或采用阴离子交换色谱模式分离分析。

大家意见都好不一样哦，看来我要多尝试几次啦。谢谢哦~~
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14楼2013-05-02 23:32:29
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huihui2255365

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先把乙腈比例调小点吧~出峰时间晚点估计就能把峰分开~再不然有长柱的话换根长驻试试。。
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15楼2013-05-03 08:41:31
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by huihui2255365 at 2013-05-03 08:41:31
先把乙腈比例调小点吧~出峰时间晚点估计就能把峰分开~再不然有长柱的话换根长驻试试。。

在尝试了，不知道可不可行呀
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16楼2013-05-03 10:33:19
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赵明东

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的建议也是把溶剂比适当的改一下，多试几个不同的溶剂比。这种峰分不开，就是溶剂比不合适，保留时间集中在一起了。再不行再试其他的加缓冲溶液啥的。。
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17楼2013-05-03 11:17:44
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govern1988

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把乙腈比例调小点，走梯度
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18楼2013-05-03 11:22:36
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govern1988

银虫 (小有名气)
然后再加添加剂，你这个化合物是酸性的，适当加甲酸或者乙酸调节PH值
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19楼2013-05-03 11:24:10
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liuhailong37

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议调整色谱条件，流动相比例，个人认为最好换一下其他流动相，调调ph试一下
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20楼2013-05-03 11:50:14
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zly86 at 2013-05-02 20:58:21
保留太弱了，需要增加保留，将样品峰和系统峰分开才能做定量结果，否则是不准确的。
增加保留的方法：
1.降低流动相中乙腈含量，你的乙腈含量太高（66.7%），试试从5%到50%乙腈，30分钟的梯度，另外，建议不要用纯 ...

这个是用乙腈和水1：1做的，看是不是可以了？分的可以吗?还要走梯度吗？

1比1.png



2比1.png
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21楼2013-05-03 14:44:59
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by liuhailong37 at 2013-05-03 11:50:14
建议调整色谱条件，流动相比例，个人认为最好换一下其他流动相，调调ph试一下

看看我用乙腈和水1：1走的是不是可以？还需要继续改条件优化吗？
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22楼2013-05-03 14:46:12
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by govern1988 at 2013-05-03 11:24:10
然后再加添加剂，你这个化合物是酸性的，适当加甲酸或者乙酸调节PH值

看看我用乙腈和水1：1走的是不是可以？还需要继续改条件优化吗？下图
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23楼2013-05-03 14:46:25
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 赵明东 at 2013-05-03 11:17:44
我的建议也是把溶剂比适当的改一下，多试几个不同的溶剂比。这种峰分不开，就是溶剂比不合适，保留时间集中在一起了。再不行再试其他的加缓冲溶液啥的。。

看看我用乙腈和水1：1走的是不是可以？还需要继续改条件优化吗？见下图
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24楼2013-05-03 14:46:37
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jixfeng

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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2楼: Originally posted by staffyujay at 2013-05-02 16:45:58
这么早出峰不是都和溶剂峰混在一起了，而且响应也不高啊~这是溶剂峰吧。。。。

单位是AU哦 很高了 第一张都过载了
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26楼2013-05-03 16:09:43
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
26楼: Originally posted by jixfeng at 2013-05-03 16:09:43
单位是AU哦 很高了 第一张都过载了...

那表示1：1可行？
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27楼2013-05-03 16:20:22
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jixfeng

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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21楼: Originally posted by chenhw06 at 2013-05-03 14:44:59
这个是用乙腈和水1：1做的，看是不是可以了？分的可以吗?还要走梯度吗？

1比1.png

2比1.png
...

加点盐 酸性的 按百分比0.1~0.5% 加入 PH调节到3~5以下。试试 你不觉得你的峰都不是很尖锐么，就是解离的原因。  没有全波长扫描检测器 你又不走空白 实在无法对你的图谱进行判断。 反正比你一开始的好了。
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28楼2013-05-03 16:20:23
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
28楼: Originally posted by jixfeng at 2013-05-03 16:20:23
加点盐 酸性的 按百分比0.1~0.5% 加入 PH调节到3~5以下。试试 你不觉得你的峰都不是很尖锐么，就是解离的原因。  没有全波长扫描检测器 你又不走空白 实在无法对你的图谱进行判断。 反正比你一开始的好了。...

有进行全波长扫描啊，不过没有把图发上来，要看吗？要看我去复制去？还有那个最大的峰是苯酚，我之前有拿标品定性了，知道我要的峰出在什么位置，还要走空白吗
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29楼2013-05-03 16:26:00
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zly86

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by chenhw06 at 2013-05-02 21:06:09
好的，我明天做一个梯度试试去，不过我看的所有文献都是C8，要改吗？？...

文献都做完了，你还做个啥？
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30楼2013-05-03 18:18:20
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zly86

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by chenhw06 at 2013-05-02 21:06:09
好的，我明天做一个梯度试试去，不过我看的所有文献都是C8，要改吗？？...

尽信书，不如无书
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31楼2013-05-03 18:18:42
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zly86

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by chenhw06 at 2013-05-02 23:32:29
大家意见都好不一样哦，看来我要多尝试几次啦。谢谢哦~~...

你就要看你的甄别能力了
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32楼2013-05-03 18:22:34
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chenhw06

金虫 (正式写手)
引用回帖:
32楼: Originally posted by zly86 at 2013-05-03 18:22:34
你就要看你的甄别能力了...

接触液相不久啊，刚学会怎么操作，具体不怎么了解。文献上也只是提到用的是C8柱，具体没有提啊。唉。。。。。好烦
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33楼2013-05-03 18:45:14
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jixfeng

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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33楼: Originally posted by chenhw06 at 2013-05-03 18:45:14
接触液相不久啊，刚学会怎么操作，具体不怎么了解。文献上也只是提到用的是C8柱，具体没有提啊。唉。。。。。好烦...

不知你现在的结果如何了 其实大家的意见都是相似的 你的条件不行 连“凑活”都不行 你把流动相调到1:1后 效果提高了很多（粗看可以凑活了） “貌似”各峰基线分离了 但基线分离就是好的方法了？ 是否有峰没有跑出 是否有峰过宽没有显示 是否还有峰包含 等等 还有看你的图 你是在做反应 走的反应液？ 如果是的话 可以保证重现性的话 你就把1:1做中控方法好了（除了保留时间稍短）。上面个人提供的检查方法为以后调整保留
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34楼2013-05-06 13:36:33
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chenhw06

金虫 (正式写手)
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34楼: Originally posted by jixfeng at 2013-05-06 13:36:33
不知你现在的结果如何了 其实大家的意见都是相似的 你的条件不行 连“凑活”都不行 你把流动相调到1:1后 效果提高了很多（粗看可以凑活了） “貌似”各峰基线分离了 但基线分离就是好的方法了？ 是否有峰没有跑出  ...

我确实走的我的反应液，我感觉我要的峰确实都已经跑出来，就是分离度确实不是很好，可以问一下，中控方法是什么意思吗？不懂哪
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35楼2013-05-06 15:48:30
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