应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助microRNA real time pcr结果分析
51/1返回列表
查看: 1426  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

momo2111

木虫 (小有名气)

[求助] 求助microRNA real time pcr结果分析

新人刚入手microRNA，第一次做real time pcr只做了一个样品U6的三个复孔，结果出来很奇怪，溶解曲线有双峰，而且前面的峰很高，扩增曲线也没有起来，由于刚接触，请各位大侠帮忙分析一下原因，十分感谢！

Melt Curve2.jpg



Amplification Plot2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-23 11:43:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

momo2111

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-23 14:22:23
都没有扩增曲线，分析溶解曲线没有意义，
1. 没有加模板，无模板扩增？
2. 仪器没有坏吧
3. RNA提的不好？没有提取到RNA，或者RNA降解了？抑或没有逆转录好？
4. 引物设计的不好？

RNA提完之后A260/A280=1.96，而且马上就进行逆转录的，而且仪器没有坏呢，现在只能先再试一次，看看结果。不知道cDNA的量 和引物浓度有没有关系，我哦想问一下，我之前问试剂公司他们告诉我引物终浓度是500nM，这引物终浓度指的是上游引物和下游引物分别是500nM，还是两个引物加起来500nM?
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-24 18:35:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
momo2111(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-24 22:29:45
都没有扩增曲线，分析溶解曲线没有意义，
1. 没有加模板，无模板扩增？
2. 仪器没有坏吧
3. RNA提的不好？没有提取到RNA，或者RNA降解了？抑或没有逆转录好？
4. 引物设计的不好？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-04-23 14:22:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by momo2111 at 2013-04-24 18:35:04
RNA提完之后A260/A280=1.96，而且马上就进行逆转录的，而且仪器没有坏呢，现在只能先再试一次，看看结果。不知道cDNA的量 和引物浓度有没有关系，我哦想问一下，我之前问试剂公司他们告诉我引物终浓度是500nM，这引 ...

这引物终浓度指的是上游引物和下游引物分别是500nM，分别
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-04-24 19:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

momo2111

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-24 19:51:03
这引物终浓度指的是上游引物和下游引物分别是500nM，分别...

那应该就没错啊，下次再换个样品试试。扩增曲线没有，但结果里面CT值却是有的，13左右
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-24 22:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 278求调剂 +27 范婷娜 2026-04-07 31/1550 2026-04-09 20:49 by zhouxiaoyu
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[论文投稿] 求助文献原文 10+3 18500821399 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:56 by 北京莱茵润色
[考研] 322求调剂，08工科 +3 今天是个小号 2026-04-08 3/150 2026-04-09 15:53 by wp06
[考研] 材料工程085601，270求调剂 +26 @ASDF1234 2026-04-08 28/1400 2026-04-09 15:47 by wp06
[考研] 336求调剂，一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 315求调剂 +3 TUZEIQAQ 2026-04-02 3/150 2026-04-07 17:32 by chenp123
[考研] 080500求调剂 +12 黄宇博 2026-04-06 12/600 2026-04-07 12:41 by upczlm1989
[考研] 277工科求调剂 +10 1915668 2026-04-04 11/550 2026-04-06 23:53 by 心媛意北
[考研] 求调剂 +5 wos666 2026-04-03 5/250 2026-04-06 10:13 by 蓝云思雨
[考研] 复试调剂 +5 asdasdassda 2026-04-05 5/250 2026-04-06 09:32 by dongzh2009
[考研] 化学357分，考研调剂 +11 .Starry. 2026-04-04 12/600 2026-04-06 06:28 by houyaoxu
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 368求调剂 +5 今华习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 18:47 by imissbao
[考研] 22408求调剂 354分 可跨专业 +3 hannnnnnn 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:35 by 土木硕士招生
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 一志愿重庆大学085404，总分314分，求调剂 +4 zf83hn 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:25 by 啵啵啵0119
[考研] 工科341分调剂 +3 洛多罗 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:20 by 1753564080
[考研] 求调剂 +3 心想事成可 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:22 by wangjy2002
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭