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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助！为什么我的蛋白紫外光谱的最大吸收峰在257nm？？？疯掉了
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一毫升的枪

新虫 (小有名气)

[求助] 求助！为什么我的蛋白紫外光谱的最大吸收峰在257nm？？？疯掉了

RT，我纯化出来的蛋白质扫描紫外光谱的时候最大吸收峰在257nm,觉得很奇怪啊，怎么会偏离280那么多呢？求各位大侠帮忙解答啊
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1楼2013-04-18 10:06:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 分析得有道理 2013-04-20 08:40:42
一般蛋白质的最大吸收峰在280，只是一般情况，Tyr λmax 是275， Phe λmax 是257， Trp λmax是 280.可能你蛋白质中Phe的含量比其他二者要高。如果溶液或蛋白中存在其他干扰物质另当别论。
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2楼2013-04-18 10:25:03
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普通回帖

BioChemCom

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-20 08:41:18
把序列放上来，大家就会帮你分析了。楼上的分析也很对。总体上来说，你的蛋白可能没有Trp，但是Phe比较多。除非例外，你的蛋白吸收系数不会很大。
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3楼2013-04-18 12:06:17
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一毫升的枪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-04-18 10:25:03
一般蛋白质的最大吸收峰在280，只是一般情况，Tyr λmax 是275， Phe λmax 是257， Trp λmax是 280.可能你蛋白质中Phe的含量比其他二者要高。如果溶液或蛋白中存在其他干扰物质另当别论。

我的蛋白Phe11个，Trp2个，Tyr6个~~~
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4楼2013-04-18 13:19:19
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一毫升的枪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by BioChemCom at 2013-04-18 12:06:17
把序列放上来，大家就会帮你分析了。楼上的分析也很对。总体上来说，你的蛋白可能没有Trp，但是Phe比较多。除非例外，你的蛋白吸收系数不会很大。

mgrrparcyr ycknkpypks rfcrgvpdak irifdlgrkk akvdefplcg hmvsdeyeql
ssealeaari cankymvksc gkdgfhirvr lhpfhvirin kmlscagadr lqtgmrgafg
kpqgtvarvh igqvimsirt klqnkehvie alrrakfkfp grqkihiskk wgftkfnade
fedmvaekrl ipdgcgvkyi psrgpldkwr alhs
这是我纯化的蛋白序列，F11个W2个Y6个。
一开始怀疑是否结合了DNA啥的，变性后跑核酸胶也没看出来有
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5楼2013-04-18 13:21:45
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玉_凌风

新虫 (小有名气)
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wizardfan: 应助指数-1, 更倾向于交流 2013-04-20 08:42:02
我的蛋白目前还不是很纯，吸收峰在245，坑爹啊1
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学习
6楼2013-04-19 08:34:54
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BioChemCom

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我看了你的序列，感觉上不太对，是否有DNA污染？F11个W2个Y6个，吸收峰不太可能在257nm。
你的纯化方案是什么呢？在那里表达的？有没有打质谱鉴定分子量？说不定你纯化的蛋白不是你的目的蛋白。
我知道很多在E coli表达量比较低的蛋白，大量纯化的过程中，会把某些杂蛋白留下来。
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7楼2013-04-19 09:55:28
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256k

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ynkuaile at 2013-04-18 10:25:03
一般蛋白质的最大吸收峰在280，只是一般情况，Tyr λmax 是275， Phe λmax 是257， Trp λmax是 280.可能你蛋白质中Phe的含量比其他二者要高。如果溶液或蛋白中存在其他干扰物质另当别论。

正解
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8楼2013-04-19 13:30:21
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 一毫升的枪 at 2013-04-18 13:19:19
我的蛋白Phe11个，Trp2个，Tyr6个~~~...

你的蛋白Phe11个，Trp2个，Tyr6个~~~，因为Phe 的最大吸收峰 是257nm,所以你的蛋白质的最大吸收就是应该在257nm！这是正常的！一般的蛋白质的最大吸收峰被认为是在280nm 是因为最大吸收就是 280nm，而且色氨酸的吸收峰比酪氨酸和脯氨酸的吸收峰要强，但是前提是一个蛋白质中的色氨酸、酪氨酸和脯氨酸三者数量一样或者差不多，而你的蛋白质的Phe11个，Trp2个，Tyr6个，Phe是Trp的5倍还多，所以蛋白质的最大吸收峰中的280nm 峰当然不可能是最大吸收峰了！这有什么奇怪 的！
另外，Trp2个也有可能受到其他氨基酸残基的遮蔽而进一步减少了吸收。
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9楼2013-04-21 15:51:14
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一毫升的枪

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by BioChemCom at 2013-04-19 09:55:28
我看了你的序列，感觉上不太对，是否有DNA污染？F11个W2个Y6个，吸收峰不太可能在257nm。
你的纯化方案是什么呢？在那里表达的？有没有打质谱鉴定分子量？说不定你纯化的蛋白不是你的目的蛋白。
我知道很多在E co ...

已经送去打质谱鉴定了，但是WB做出来的结果是我要的条带~~~很纠结
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10楼2013-04-21 21:59:21
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