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无聊先森

银虫 (小有名气)

[求助] 液相梯度洗脱时流动相梯度变化速度与出峰时间的关系

反相时使用梯度洗脱,流动相的梯度变化速度和出峰时间有什么关系吗?为什么我计算出来的在相应流动相浓度下并没有出现该出现的峰呢?
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feng100381

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主怎么计算的?
你看到流动相入口处到了你计算的浓度,柱子里再到你需要的浓度是有延迟的。
即使到了相应的浓度,流动相和样品也要有相互作用的过程。
梯度洗脱靠计算来估计保留时间比较困难。
蛋白
4楼2013-04-16 10:59:51
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duliuhui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流,欢迎常来哦。 2013-04-16 08:47:05
梯度变化与保留时间当然有关系了,反相上如C18柱一般按极性大小顺序洗脱,极性越小保留越大。另外填料类型、流动相pH都对保留有较大影响。
梯度变化速度快,相应出峰会更早。不知楼主是如何计算出峰时间的?
2楼2013-04-15 22:46:08
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456895

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
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3楼2013-04-16 10:34:21
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无聊先森

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by duliuhui at 2013-04-15 22:46:08
梯度变化与保留时间当然有关系了,反相上如C18柱一般按极性大小顺序洗脱,极性越小保留越大。另外填料类型、流动相pH都对保留有较大影响。
梯度变化速度快,相应出峰会更早。不知楼主是如何计算出峰时间的?

A泵是缓冲盐,B泵是乙腈。我先用乙腈从百分之十到百分之百跑60min,看出峰时间,再根据出峰时间算出乙腈浓度,并算得其梯度。按理说,出峰会依据理论来,可完全不一样,这是为什么呢?
5楼2013-04-16 11:02:10
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