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xuyannd

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】梯度洗脱极性 已有6人参与

请教一下各位:我做的某中药采用聚酰胺柱分离得到70%乙醇洗脱片段和95%乙醇洗脱片段,然后进液相采用如下梯度洗脱程序:0-10min 5%乙腈,10-35min 20%乙腈,35-50min 35%乙腈, 50-60min 45%乙腈,60-70min  65%乙腈,70-85min  90%乙腈,85-95min  5%乙腈,得到的95%乙醇洗脱片段中有一个主要的峰在85.9min,其余的几个小峰也在80min左右,那么我们这几个物质的极性是怎么样的?用什么溶剂可以萃取得到啊?朢有经验的指导一下啊!
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qingyue329

金虫 (小有名气)


xiaodu2007693(金币+1):谢谢交流~ 2010-05-17 21:02:33
xuyannd(金币+5): 2010-05-17 21:35:01
xuyannd(金币+5): 2010-05-17 21:37:28
本人最近在HPLC,一点经验提供给您,希望有所帮助:
首先,感觉你的基线不太平,不知道用的波长是什么,考虑一下出的峰的确是要的东西——你可以进个空针,对照一下;
其次,若你要的东西,确定是在后面八十多分钟才出峰,那么肯定极性不大,应选择极性小的溶剂吧。
另有一点不明,你梯度洗脱,乙腈应该一直比例增加啊,为什么最后是5%呢?
2楼2010-05-17 20:44:36
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xiaodu2007693

木虫 (著名写手)

药学版~龙猫


xuyannd(金币+5): 2010-05-17 21:37:49
huqiu1953(金币+1):感谢您认真发言参与交流~ 2010-05-24 08:57:15
首先,你的梯度设的太多了,没必要,前70分钟都没有成分
其次,如果你说的对,85.9是你的成分,那它的极性相当小了,90%的乙腈洗脱能力是超强了,但我个人认为那个不一定是你的成分,因为最后10min你的溶剂系统回归到5%的乙腈,可能是溶剂峰
最后,给你个建议,起始的比例设为50%,直到100%的乙腈,中间可以多设2-3个,看看你的大峰能出来不,如果没出来,那它就不是成分,如果是,自然会出来的。建议后面85-95min,这个梯度去掉。
欢迎您来药学版~
3楼2010-05-17 21:09:31
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xuyannd

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by qingyue329 at 2010-05-17 20:44:36:
本人最近在HPLC,一点经验提供给您,希望有所帮助:
首先,感觉你的基线不太平,不知道用的波长是什么,考虑一下出的峰的确是要的东西——你可以进个空针,对照一下;
其次,若你要的东西,确定是在后面八十多分 ...

梯度洗脱程序最后不是要有一段平衡时间吗,我最后的85-95min是用来平衡的啊,请问你们不是这样做吗吗?
4楼2010-05-17 21:46:17
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xiaodu2007693

木虫 (著名写手)

药学版~龙猫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by xuyannd at 2010-05-17 21:46:17:



   梯度洗脱程序最后不是要有一段平衡时间吗,我最后的85-95min是用来平衡的啊,请问你们不是这样做吗吗?

那也只能叫做是用来平衡的,不能算是你的梯度了
包括在写论文的时候,你还要把这个写进去吗
所以,在最后那10min出来的东西不能算是你的成分了

[ Last edited by xiaodu2007693 on 2010-5-23 at 16:05 ]
欢迎您来药学版~
5楼2010-05-17 23:40:37
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乙酰水杨酸

木虫 (正式写手)

KOP

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
wtf66(金币+1):谢谢参与 2010-05-23 15:54:52
梯度设置的不合理  不如前面一段没有什么成分,可以从70开始走线性梯度到100%
浮世绘卷拓不懂濯清涟不妖
6楼2010-05-23 15:43:56
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batistuta28

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
huqiu1953(金币+1):鼓励新虫发言参与交流~欢迎常来药学专区,让我们共同进步~ 2010-05-24 08:56:35
我觉得应该先用适当溶剂萃取再进行液相分析,液相条件摸索一下,30分钟,梯度从乙腈50一直到100,看看情况再说,如果是响应值比较小的情况,也不排除是溶剂峰的可能。
7楼2010-05-24 08:52:20
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求学小子

金虫 (小有名气)

我看还是先跑个空白来确定是不是溶剂峰,然后再调节比例吧!一般如果是梯度变化引起的溶剂峰也不会85min开始设置,85.8min就出峰的,应该会延长5min左右吧!所以还是先跑个空白再说!楼主的梯度确实设置的比较多和有机相起始浓度过小。
8楼2010-05-24 21:48:43
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