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lixiang1988

银虫 (小有名气)

[求助] EDTA在做DNA酶切割是的作用

各位虫友，我最近在做 使用酶切割DNA的实验， 查了很多文献，发现在配置酶的缓冲溶液时，很多时候需要 1 mM 的 Na2EDTA .但是在酶淬灭活性的时候，用的是100 mM 的 Na2EDTA。我很迷惑，在这里 Na2EDTA 的作用是干什么的啊？同时，因为在酶反应中需要镁离子作为激活剂，那么 Na2EDTA 不会络合镁离子吗？
小虫不是搞生物出身的，所以对这个问题有点迷茫，还请各位大哥大姐多多指教。
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1楼 2013-04-02 16:51:21
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cdl007

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-26 21:15:26
gyesang: 回帖置顶 2013-04-26 21:15:28
酶切是不可能加edta的，但是内切酶的存储时 有的是要加edta，也是为了保护酶不被其他蛋白酶降解
内切酶存储液中edta量很少，再配到 反应体系里，浓度就更小了，酶切缓冲液里都有Mg2+成分补充，足够那点edta饱和的
后面终止的话，就要加大量的edta了
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5楼2013-04-03 09:21:18
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lixiang1988: 金币+2 2013-04-02 17:53:57
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:42:19
酶切终止反应，用edta，螯合2价镁离子。
只有胰酶配的时候要加edta，为的就是螯合2价离子，细胞外基质蛋白锚定需要2价离子存在，
加edta可以使细胞容易脱离
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2楼2013-04-02 17:39:54
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lixiang1988

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cdl007 at 2013-04-02 17:39:54
酶切终止反应，用edta，螯合2价镁离子。
只有胰酶配的时候要加edta，为的就是螯合2价离子，细胞外基质蛋白锚定需要2价离子存在，
加edta可以使细胞容易脱离

非常感谢你，不过我还是有点不清楚。那为什么在做酶切割反应是，要在缓冲溶液中加入1 mM 的 EDTA 啊？这时候的EDTA的作用是干什么的啊？
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3楼2013-04-02 17:55:52
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cdl007

木虫 (正式写手)
你是不是搞错了？那个材料看到酶切里要加edta？发来看看

据我现有的知识，你说的情况不可能存在
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4楼2013-04-03 08:51:50
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