应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真核转染表达，求助
51/1返回列表
查看: 988  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

1338070201

新虫 (初入文坛)

[求助] 真核转染表达，求助

各位大神，我将我的蛋白克隆到一个带有puro抗性的真核质粒上，想筛选稳转。但是可能是我蛋白带有核酸内切酶活性的缘故，瞬时转染在293T细胞中都不表达。我想问问有什么解决方法，换质粒行吗？有哪些质粒可供选择？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
一切成功来源于脚踏实地
1楼 2013-04-01 11:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

here0009

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1338070201: 金币+25, ★★★很有帮助 2013-04-02 15:37:26
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 18:08:49
你把内切酶活性的关键位点突变掉看下是否可以表达，如果可以，则说明是内切酶活性而非载体的原因。可能再换载体也没什么用了。不过你最好还是一些参考内切酶表达的文献看看吧，
赞一下 回复此楼
Forthemoon
4楼2013-04-02 15:28:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1338070201: 金币+5, ★有帮助 2013-04-02 15:37:44
即便有核酸内切酶活性，瞬时表达后，也应该能拿到目的蛋白啊。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-01 12:02:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1338070201

新虫 (初入文坛)
应该就是不表达啊，western和免疫荧光检测不到，puro筛选稳转全部死光，真的让我很死机啊
赞一下 回复此楼
一切成功来源于脚踏实地
3楼2013-04-01 15:21:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nlbtr

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1338070201 at 2013-04-01 15:21:33
应该就是不表达啊，western和免疫荧光检测不到，puro筛选稳转全部死光，真的让我很死机啊

要确定您的质粒是否已经转进去，转染条件之前摸索好了吗？
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-02 16:42:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 成果系统访问量大，请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦，已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 材料化工调剂 +11 今夏不夏 2026-03-01 12/600 2026-03-01 22:33 by 刘兵
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 材料学硕318求调剂 +3 February_Feb 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:21 by gaoxiaoniuma
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[论文投稿] 求助coordination chemistry reviews 的写作模板 10+3 ljplijiapeng 2026-02-27 4/200 2026-03-01 09:07 by babero
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭