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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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1338070201

新虫 (初入文坛)

[求助] 真核转染表达,求助

各位大神,我将我的蛋白克隆到一个带有puro抗性的真核质粒上,想筛选稳转。但是可能是我蛋白带有核酸内切酶活性的缘故,瞬时转染在293T细胞中都不表达。我想问问有什么解决方法,换质粒行吗?有哪些质粒可供选择?
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here0009

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1338070201: 金币+25, ★★★很有帮助 2013-04-02 15:37:26
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 18:08:49
你把内切酶活性的关键位点突变掉看下是否可以表达,如果可以,则说明是内切酶活性而非载体的原因。可能再换载体也没什么用了。不过你最好还是一些参考内切酶表达的文献看看吧,
Forthemoon
4楼2013-04-02 15:28:00
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nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1338070201: 金币+5, 有帮助 2013-04-02 15:37:44
即便有核酸内切酶活性,瞬时表达后,也应该能拿到目的蛋白啊。
2楼2013-04-01 12:02:20
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1338070201

新虫 (初入文坛)

应该就是不表达啊,western和免疫荧光检测不到,puro筛选稳转全部死光,真的让我很死机啊
一切成功来源于脚踏实地
3楼2013-04-01 15:21:33
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nlbtr

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 1338070201 at 2013-04-01 15:21:33
应该就是不表达啊,western和免疫荧光检测不到,puro筛选稳转全部死光,真的让我很死机啊

要确定您的质粒是否已经转进去,转染条件之前摸索好了吗?
5楼2013-04-02 16:42:31
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