| 查看: 1864 | 回复: 31 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
hyacinth326金虫 (正式写手)
|
[求助]
请教大家一个有关载体构建的问题，金币多多~~
|
|
|
各位兄弟姐们大家好，我想请教一个关于载体构建的问题，因为这个载体已经构建了半年了，一直不成功，我们导师私底下说，如果我再构建不成功的话，就只能说明我能力有问题了，所以大家一定多帮帮我，我不想被别人说成是能力问题。 首先介绍一下基本情况吧：我想构建一个载体，包含两个片段，片段一：还有一个质粒的温度敏感复制区和复制蛋白，在这个片段的选择上我认为是应该没有问题的，因为我是通过要用做模板的这个质粒与构建这个质粒的原始质粒进行比对选取的，将pcr出来的目的片段连接到克隆载体上。片段二：是一个质粒的多克隆位点，抗生素序列还有蔗糖致死基因，这个片段pcr获得之后就连到克隆载体上了，并且抗生素抗性和蔗糖致死功能都验证了没有问题。然后我将这两个连接到克隆载体上的片段切下来，连接转化大肠杆菌感受态，结果试了很多次都没有阳性转化子。 我用的限制性内切酶是NcoI和XhoI，实在找不出原因了，麻烦大家帮忙分析一下可能存在的原因吧，如果能解决问题，小女子甘愿奉上所有金币，只为争一口气。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有112人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 目的基因构建载体方向问题概念有点不清楚，请教各位大侠
已经有5人回复
- 请教高手：转有pACYCDuet-1和pETDuet-1双载体四基因的共表达问题
已经有9人回复
- 关于环氧云铁中间漆请教各位大侠！问题多多，希望虫子多多帮助！
已经有7人回复
- 遇到大麻烦了，将一个3.1k的片段连入4.5k的载体，请教各位有没有什么好方法
已经有10人回复
- 请教各位高人，基因克隆表达的流程是什么？
已经有8人回复
- 载体构建技术请教，如何设计引物提取基因插入载体中？
已经有3人回复
- Bio-rad蛋白电泳的问题请教，有图，希望有经验者多多指教！
已经有27人回复
- 有关浸渍法制备催化剂负载量的问题
已经有14人回复
- 关于氧化铝酸性位问题
已经有6人回复
- 【公告】微米纳米版专家介绍及顾问室链接[20120909更新]
已经有11人回复
- 【求助/交流】请教关于pcambia1301
已经有8人回复
hyacinth326
金虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 2003.3
- 散金: 304
- 红花: 4
- 帖子: 394
- 在线: 1338.8小时
- 虫号: 1502977
- 注册: 2011-11-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
9楼2013-04-02 20:07:32
2楼2013-03-31 22:50:22
3楼2013-03-31 23:04:05
hyacinth326
金虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 2003.3
- 散金: 304
- 红花: 4
- 帖子: 394
- 在线: 1338.8小时
- 虫号: 1502977
- 注册: 2011-11-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
4楼2013-04-01 12:22:54