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T-A克隆一直做不出来
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| 片段345bp，用Taq酶扩增纯化后测得浓度为49.3ng/ul，用Takara pmd 19-T simple vector试剂盒连接，严格按照说明书操作，感受态细胞为DH5a，蓝白斑筛选结果 阴性对照没有菌落，阳性对照均为白色菌落，但是实验平板上却全是蓝色菌落，重复三次结果都一样，不知道原因在哪啊？ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-19 18:40:37
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-03-19 18:40:37
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做不出来原因很多，得一个个对照排除。我前段时间也是一直做不出来，琢磨了好久，后来发现是氨苄的问题。 我认为你可以从以下几个方面来分析： 1）PCR产物（楼上也指出是不是酶的问题，或者扩增其他片段做克隆，看有无类似的结果） 2）连接载体 3）感受态（我们课题组发现有些公司的感受态分批次，有时候整一批感受态都不好用，你可以换其他公司产品试试） 4）如果在操作上没问题，也就是说你以前用同样的操作做出来克隆的话，那就重点考虑以上3点。个人意见，仅供参考，祝顺利！ |
9楼2013-03-19 08:41:45
liyu0355
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2楼2013-03-17 22:59:20
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j2
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4楼2013-03-18 09:02:48